多克隆抗体制备

1. 免疫动物：两只新西兰兔

2. 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。

3. 免疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。

4. 免疫：用生理盐水稀释免疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后大腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/4的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。

5. 取血：用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血清。

6. 时间：

第1星期 采血2ml（获得0.5-1ml免疫前血清）

完全弗氏佐剂（CFA）混合的200μg抗原免疫兔。

第2星期

完全弗氏佐剂（CFA）混合的200μg抗原免疫兔。

第4星期

不完全弗氏佐剂（IFA）混合的100μg抗原免疫兔。

第5星期

取检测血清20-30ml

取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测，

溶解在生理盐水中的100μg抗原免疫兔。

第6星期

如果检测阳性第一次采血20-30ml,

溶解在生理盐水中的100μg抗原免疫兔；

如果上次检测是阴性，取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测。

第7星期

第二次采血20-30ml,

溶解在生理盐水中的100μg抗原免疫兔；

如果检测仍为阴性，需要讨论这个项目是否继续。

第8星期

第三次采血20-30ml,

溶解在生理盐水中的100μg抗原免疫兔。

第9星期

末次放血20-30ml,

纯化混合血样，平均每次纯化可以获得100-150mg抗体，最后进行ELISA和WB等质量检测。

7. 注意：

在整个项目中，兔子需要保持9周的免疫和放血。检测的结果将决定这个项目的继续、修改或终止。应 客户要求，可以延长免疫继续采血，但需另外付费。