T7Select 噬菌体展示系统

互联网2008-07-21

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T7Select™ 噬菌体展示系统是Novagen开发的基于T7噬菌体(而非传统的M13)创新的基因发现研究产品。目的序列(C-端)与T7基因10 衣壳蛋白而表达得到的多肽和蛋白即可暴露(展示)与病毒(T7噬菌体)的表面。

复制周期短，细胞质蛋白组装，操作和储存方便，超高克隆效率，以及T7噬菌体强大的天然特性使Novagen的T7Select成为替代传统M13系统的更好选择，用于高效文库构建和亲和淘洗。由于T7噬菌体展示系统能构建和筛查更大的文库，能使研究者更有可能发现“沧海一粟”的目标分子。

该系统以多种产品形式提供，包括T7Select噬菌体克隆试剂盒，包含OrientExpress™ cDNA合成的试剂盒以及T7Select噬菌体克隆系统。

另有12种预制人正常组织和病理组织来源的cDNA文库提供，这些文库都是用T7Select10-3载体构建的。

T7噬菌体展示系统与M13系统有什么区别？

M13和T7噬菌体最大的区别就在于成熟病毒从宿主细胞中释放的方式不同。M13噬菌体在周质中组装，必须经细胞膜分泌；而T7在细胞质中完成组装后直接从细胞裂解出来。因此，任何抑制分泌过程的蛋白和多肽都不能在M13系统中展示，或展示效果很差。

例如，具有带电荷氨基酸残端的疏水蛋白、肽或多肽等，会因穿膜困难而无法展示。T7文库则不受这种序列限制，而且，一般来说T7展示系统表达蛋白或多肽的种类要比M13这样的丝状噬菌体更多。

T7比M13优越主要还是表现在易于操作、表达能力以及亲和淘洗富集等方面。T7虽然要求体外包装但生长极为迅速。T7噬斑形成仅需3小时，比M13系统节约整整1天。M13则在测序方面比T7更方便。

T7噬菌体极为稳定，能在各种严酷的条件下不被破坏，而其它噬菌体常在亲和淘洗的过程中失去活性。因此，在T7系统的结合/洗脱过程中，可选用的试剂种类较广泛，亲和淘洗后噬菌体仍然保持很高的感染活性。

产品应用

许多基于多肽或蛋白功能来获得其编码cDNA的研究多可以选用噬菌体展示技术，例如：

蛋白相互作用(例如激素，抗体，受体)

酶分析，酶抑制

核酸-蛋白相互作用

抗原决定簇作图

突变分析

特点与优点

独有的产品	是唯一采用T7为载体的噬菌体展示系统，没有市售同类产品。
独有的预制文库	预制cDNA文库是Novagen特有的亲和掏洗产品，其它商业化亲和掏洗文库是多肽文库而非cDNA文库。
操作方便	提供完备的cDNA合成、克隆、包装、表达和亲和掏洗的高质量试剂盒以及详细的优化操作步骤指导。
大通量亲和淘洗	T7极其稳定，在亲和掏洗时可以采用各种试剂以将噬菌体从固相结合物上释放下来，例如1% SDS，5 M NaCl，4 M尿素，2 M盐酸胍，10 mM EDTA，100 mM DTT，pH 4-10。
高代表性文库构建与展示	采用高效包装提取物和T7克隆试剂盒能轻易地构建大的展示文库。
有高、中、低拷贝表达供选择	用户可以根据表达和亲和掏洗(蛋白结合)的具体要求方便地选择相应的高拷贝或低拷贝表达载体: T7Select系统提供多种在T7表面以高、中、低拷贝表达蛋白的T7噬菌体载体。极高拷贝数(415-1载体为415拷贝)载体适合用于小、低亲合力的结合域。低拷贝数(1-1b和1-2a-c载体为0.1-1拷贝)载体适合用于分析高亲和力结合域。新推出的中拷贝展示载体(10-3)可以中等拷贝数展示(5-15)，使T7Select系统也可以用于分析中等亲和力的结合。
节省经费	试剂盒组成完整，价格合理(例如，T7Select OrientExpress Systems)，可以为用户节省更多费用。
展示广谱的蛋白及多肽	有可以展示多肽或多达1200氨基酸的蛋白的载体供选择
对蛋白类型无限制 (与M13不同)	可表达的蛋白的种类比M13系统更多。T7展示的蛋白(或多肽)输出无需经过分泌途径。像b-gal等之所以不能用M13这样的丝状噬菌体展示原因正在于此。序列非依赖型。
毒性蛋白问题	可选择高拷贝或低拷贝表达
快速	T7 生长快，节约克隆和筛查时间，3小时内即可形成噬斑。
完整的文库	包装效率高，文库代表性好。
更强大的蛋白展示功能	蛋白通过C-端融合表达而不是通常的N-端融合。插入片段被克隆到T7Select载体基因10 的C-端，因此，即使插入片段内含有终止密码子也可以被表达和展示。这在必须在N-端克隆的M13是无法进行的。N-端融合克隆cDNA时常会造成麻烦，因为poly(A)区( cDNA中为oligo d(T))常位于翻译终止密码子的下游。