巯基乙酸盐诱导腹膜炎

腹膜内注射巯基乙酸盐可以稳定诱导大量的中性白细胞到腹腔中。对这些细胞的运输被认为是通过CXCL1，CXCL2，和CXCL8等炎症趋化因子介导的（1，2）。因此这一模型可以用于在生物工程小鼠（例如敲除或转基因小鼠）中检测中性白细胞向这些炎症趋化因子移动，或者能够用于检测确定的分子（例如一些小分子或者抑制类抗体）抑制这些因子的化学活性.这一实验方法被作者成功的用于鉴定病毒的多重的趋化因子抑制剂的功能。

一、材料和试剂

1.抗体

（2）Ratanti-mouseCD11bFITC（SouthernBiotech1560-02）

2. 其它材料

3. 消毒的4%的溶于ddH2O的巯基乙酸盐（Sigma70157）

注意：巯基乙酸盐溶液需要用锡箔纸包好后避光置于室温下保持，可以保存几个星期直到变成棕色。变质可以影响到对腹膜炎的诱导作用。

二、仪器

1. BDLSRII流式细胞测定器

三、步骤

1. 向小鼠腹膜内注射1 ml 消毒了的4%的巯基乙酸盐。

2. 两个小时后，麻醉小鼠。中性粒白细胞将在这个时间点左右达到高峰。实验者如果想观察到单核细胞的流入需要在麻醉小鼠前等48小时。

3. 在小鼠的下腹部切开个小口露出肌肉。注意：不要危害的腹腔的完整性。

4. 用26G1/2针慢慢的向腹腔注射10 ml 冰上预冷的PBS。注意：一些实验方案建议PBS中包含低浓度的EDTA去激活腹膜细胞的最大程度的产出量。

5. 拔掉注射针。

6. 通过抓住尾巴来固定小鼠并搅拌液体3分钟尽大范围的清洗小鼠的腹腔。

7. 将小鼠放到一旁并插入一个带有18G1/2针头的10 ml 注射器。

8. 慢慢的拔动注射器尽可能多的回收PBS。

9. 记录回收的PBS体积。

10. 洗细胞5 min。

11. 弃掉上清并用100 ul 含有1：200anti-GR-1PE和anti-CD11bFITC抗体的3%的FBS重悬。

12. 在室温下孵育15 min。

13. 用1 ml PBS洗涤并且200转4℃离心5 min。

14. 弃掉上清用200 ul PBS重悬细胞。

15. 在流式细胞仪上得到这完整的200 ul 细胞量。

16. 计算Gr-1highCD11bhigh细胞数目并且根据回收到PBS体积来调整数量。

例如如果回收的PBS体积为9 ml 那么腹腔中全部的中性粒白细胞的数目=（计算的Gr-1highCD11bhigh细胞数x10 ml）/9 ml。

注意：一些实验方案简单的通过用血球计数器来数细胞。但这一结果可能不能准确的反映腹腔中中性粒细胞的数目，原因是腹腔中还有其它种类的细胞如B1B细胞和巨噬细胞。