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实验室常用溶液的配制标准程序

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实验室常用溶液的配制标准程序


关键字: 溶液 配制 标准程序


1 、 目的


保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。


2 、 该SOP变动程序


本文件的变动,可由任一使用该文件的工作人员提出,报负责人决定。如通过则公布执行。


3 、 适用范围


XXXX研发部常用溶液:3M 醋酸钠、 2N NaOH 、 5M NaCL、 Solution Ⅰ 、 Solution Ⅱ Solution 、 Solution Ⅲ 、 LB培养基、 1M Tris-HCl 、 10 ×TE Buffer 、 10 × PBS Buffer 、 苯酚/ 氯仿/ 异戊醇 、 10%(W/V )SDS 、 0.5M EDTA(pH 8.0) 、 50 ×TAEBUffer 、 20 ×SSC 、 封闭缓冲液(Wester杂交) 。

4 、 配制


4.1 、 用具


干燥洁净的200ml量桶一只,三角烧瓶两只,天平一架,250ml、1000ml广口瓶各一只。


4.2 、 配制步骤


4.2.1 、 配制NaAC溶液


⑴用天平称取40.8克分析纯的NaOAC固体,置于250ml三角烧瓶中。


⑵用100ml量桶准确取40ml去离子水,摇荡三角烧瓶使NaOH固体充分溶解


⑶加去离子水将溶液定容到100ml


⑷高压灭菌后,室温保存。


4.2.2 、 配制NaOH溶液


⑴用100ml量桶准确取80ml去离子水,置于250ml三角烧瓶中。


⑵用天平称取8克NaOH固体缓缓加入三角烧瓶中。


⑶摇荡混匀溶液。用去离子水将溶液体积定容到100ml。


⑷将混匀的溶液转移入玻璃瓶中,室温保存。


4.2.3 、 配制NaCL溶液


⑴用天平称取292.2克NaCL固体置于1L烧杯中,加入800ml的去离子水后搅拌溶解。


⑵加去离子水将溶液定容至1L,适量分成小份。


⑶高压灭菌后,4 0 C 保存。


4.2.4 、 配制 Solution Ⅰ 溶液


(1) 量取1M Tris-HCL(ph8.0) 25ml ,1.5M EDTA(ph8.0) 20ml , 20 %Glucose(1.11M) 45ml, dH 2 O 910ml , 置于1L烧杯中。


(2) 高温高压灭菌后,4 0 C 保存。


(3) 使用前每50 ml的 Solution Ⅰ 加入2 ml 的RNaseA(20mg / ml).


4.2.5 、 配制 Solution Ⅱ 溶液


(1) 量取10 %SDS 50 ml, 2N NAOH 50 ml, 置于500 ml 烧杯中。


(2) 加灭菌水定容至 500 ml,充分混匀。


(3) 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。


注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。


4.2.6 、 配制 Solution Ⅲ 溶液


(1) 称量KOAc 147g, CH 3 COOH 57.5g, 置于500 ml 烧杯中。


(2) 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。


(3) 加去离子水将溶液定容 至 500 ml。


(4) 高温高压灭菌后,4 0 C 保存。


4.2.7 、 配制 LB培养基


(1) 称取T ryptone 10g, Yeast Extract 5g, NaCl 10g, 置于1L烧杯中。


(2) 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。


(3) 滴加5 N NAOH(约0.2ml),调节ph值至7.0。


(4) 加去离子水将培养基 定容 至 1L。


(5) 高温高压灭菌后,4 0 C 保存。


4.2.8 配制 1M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)


(1) 称量121.1g Tris置于1L烧杯.


(2) 加入约800ml的去离子水。充分搅拌溶解。


(3) 按下加入70ml pH7.4, 60 pH7.6,42ml pH8.0浓盐酸调节所需要的值。


(4) 将溶液定容至1L。


(5) 高温高压灭菌后,室温保存。


注意:使溶液冷却至室温后在调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的值大约降低0.03个单位。


4.2.9 、 配制1L 10 ×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mM Tris-HCl,10mM EDTA


(1)量取溶液1M Tris-HClBuffer(pH7.4,,7.6,8.0)100ml,500mM EDTA(pH 8.0) 20ml,置于1烧杯中。


(2)向烧杯中加入800ml的去离子水,均匀混合。


(3)将溶液定溶至1L后,高温高压灭菌。


(4)室温保存.


4.3.10 、 配制 1L 10 × PBS Buffer 1370mM NaCl, 27mM KCl,10mM Na 2 HPO 4 ,20mM KH 2 PO 4 .


(1)称量NaCl 80g , KCl 2,Na 2 HPO 4 14.2g , KH 2 PO 4 ,2.7g 置于1L烧杯中。


(2) 向烧杯中加入800ml的去离子水,充分搅拌溶解。


(3)滴加HCl将pH值调节至 7.4 ,然后加入去离子水将溶液定容至1L。


(4)高温高压灭菌,室温保存。


注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需可在配方中补充1mM CaCl 2 和0.5mM MgCl 2 。


4.3.11 配制 苯酚/ 氯仿/ 异戊醇 (25:24:1)


(1)说明:从核酸除去蛋白质常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机向的分离,而异戊醇有助于消除抽屉过程中出现的气泡。


(2)配置方法:将平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)均匀混合和后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。


4.3.12 配制 10%(W/V )SDS 100ml


(1)称量10g高重度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约800ml的去离子水,68℃加热溶解。


(2)滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2.


(3)将溶液定容至100ml后,室温保存。


4.3.13 、 配制 1L 0.5M EDTA(pH 8.0)


(1)称取186.1gNa 2 EDTA.2H 2 O,置于1L烧杯中。


(2)加入800ml去离子水,充分搅拌。


(3)用NaOH调节pH值至8.0(约20g NOH) 注意:pH值至8.0时才能完全溶解。


(4)加去离子水将溶液定容至1L.


(5)适量分成小分后,高温高压灭菌。


(6)室温保存。


4.3.14 配制 1L 50 ×TAE BUffer (pH8.5) 2M Tris 醋酸,100mMEDTA


(1)称量试剂Tris 242g , Na 2 EDTA.2H 2 O 37.2g,置于1L烧杯中。


(2)向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌并溶解。


(3)加入57.1ml的醋酸,充分搅拌。


(4)家去离子水定容至1L后,室温保存。


4.3.15 、 配制 1L 20 ×SSC 3.0M NaCl, 03M 柠檬酸钠


(1)称量试剂NaCl 175.3g ,柠檬酸钠.2H 2 O 88.2g ,置于1L烧杯中。


(2)向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。


(3) 滴加14 N HCl,调节pH值至7.0后,加去离子水定容至1L.


(4)高温高压灭菌后室温保存。


4.3.16 配制 100ml 预杂交液 /杂交液(DNA杂交用),6 ×SSC (或SSPE) ,5×Denhardts 0.5%(WV) SDS , 100μg / ml Salmon DNA


(1)称量试剂 30ml 20 ×SSC (或SSPE),10ml 50×Denhardts, 5ml 10 % SDS, 1ml 10μg / ml Salmon DNA,54m dl2H 2 O ,置于200ml烧杯中。


(2)充分混匀后,使用0.45 μm 滤膜滤去杂质后使用。


4.3.17 、 配制 100ml 封闭缓冲液(Wester杂交) 5%(W/V)脱脂奶粉 TBST BUffer


(1)称量5g脱脂奶粉加入到100ml的TBST Buffer中,充分搅拌溶解。


(2)24℃保存待用(本封闭液应现配现用)。


(责任编辑:大汉昆仑王)

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