植物可溶性糖含量的测定

可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可溶性糖的定量研究对果树的品质育种具有重要意义。

一、试材及用具

1．试材 新鲜或冷冻的植物材料

二、原理

三、方法步骤

（一）试剂配制

1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO 4 •5H 2 O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。

2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC 4 O 6 H 4 •4H 2 O，分析纯）138g溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。

3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。

测定时，取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。

4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。

5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC) 2 •2H 2 O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL稀释至100mL。

6．亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾[K 4 Fe(CN) 6 •3H 2 O，分析纯]溶于水，稀释至100mL。

（二）样品提取液制备

取待测样品适量，洗净，用不锈钢刀将可食部分切成适当小块充分混匀后，按四分法取样。称取100g鲜样加入等重量的水，放入组织捣碎机中捣成1:1匀浆，有些材料匀浆比例可适当调整，多汁果蔬类可直接捣浆。

称取匀浆25.0g或50.0g（相当于样品12.5g或25.0g）放入150mL烧杯中，含有机酸较多的材料加0.5～2.0g粉状CaCO3调至中性（广泛试纸检试）。

用水将样液全部转入250mL容量瓶中，并调整体积约为200mL。置80±2℃ 水浴 保温30 min，期间摇动数次，取出加入乙酸锌溶液及亚铁氰化钾溶液各2～5mL，冷却至室温后，用水定容，过滤备用。

取已经制备的待测液100mL于200mL容量瓶中，加6 mol/L HCl 10mL。在80±2℃ 水浴 加热10min，放入冷水槽中冷却后，加甲基红指示剂二滴用6 mol/L及1mol/L NaOH溶液中和，用水定容。

（三）可溶性总糖测定

1．费林试剂的标定：取费林试剂甲、乙各5.00mL或在测定前先等体积混合后取10.00mL混合液于250mL锥形瓶中，放入玻璃珠4～5粒，先加入比预测(预测见2)仅少0.5mL的1mg/mL转化糖标准液。

将此混合液置1000W电炉上加热，使其在2min左右沸腾，准确煮沸2 min，此时不离开电炉，立即加入0.5%亚甲基蓝指示剂2～3滴，并继续以每4～5 S的滴速滴加标准糖液，直至二价铜离子完全被还原生成砖红色氧化亚铜沉淀，溶液蓝色褪尽为终点。

用准确滴定标准糖液的毫升数V 1 ，乘以标准糖液浓度[mg/mL]，即得10mL费林试剂所相当的糖的毫克数。

2．预测：取费林试剂甲、乙各5.00mL或10.00mL混合液于250mL锥形瓶中，由 滴定管 加入待测糖液约15mL，在电炉上加热至沸腾，约沸腾15 S后迅速滴加待测糖液，至呈现极轻微的蓝色为止，此时加入0.5%亚甲基蓝指示剂2～3滴，继续滴加待测糖液，直至溶液蓝色褪尽为止，记下待测糖液的用量V 2 （毫升数）。

3．准确测定：取费林试剂甲、乙各5.00mL或10.00mL混合液加入锥形瓶中，由 滴定管 加入比预测仅少0.5mL的待测糖液，并补加V 1 -V 2 毫升水（标准费林试剂所消耗的标准糖液毫升数V 1 减去预测消耗的待测糖液毫升数V 2 ，即为应补加水的毫升数），使其与标定费林试剂时的反应体积一致。

以下按费林试剂标定同样操作，继续滴至终点。前后沸腾时间须在3 min分钟左右。待测糖液消耗量应控制在15～50mL范围内，不能大于标定费林试剂所用标准糖液体积V 1 ，否则应增减称样量重新制备待测液。同法平行操作3次，取平均值。

（四）结果计算

可溶性总糖（%，以转化糖计）＝(G/V)×（A/W）×(250/1000)×100

式中： W——样品称重（g）

G——10mL费林试剂相当的转化糖（mg）

V——准确滴定时所用待测液的体积（mL）

A——稀释倍数

250——定容体积（mL）

1000——由毫克换算为克