快速PCR浅见 --纪念Kary Mullis获得诺奖30周年

对于模板制备阶段，尽量缩短模板提取时间既有利于缩短整个PCR反应时间又可以尽可能的减少模板降解。

对于纯度要求不高的模板来讲，可以尝试煮沸法提取；而对于纯度要求较高的模板来讲，可以购买核酸提取试剂盒来替代繁琐的手工提取法。对于比较容易裂解的细胞和组织的DNA（如血细胞），可以尝试直接拿来（或适当稀释后）作为PCR反应的模板，这样就可以省略模板制备阶段。

变性、退火阶段的时间可以通过多次实验摸索后适当降低，对于扩增一些长度很短的片段，甚至可以将变性和退火的时间减少到5秒以下。

也可以尝试使用两步PCR法（退火和延伸合为一步）来替代传统的三步PCR，来看是否仍能获得比较理想的产物量。延伸阶段的时间主要取决于采用的聚合酶的延伸速率，所以选用具有更高延伸速率的酶可以降低延伸时间。