二袖套法大鼠肝移植标准操作规程(SOP)

名称：二袖套法大鼠肝移植标准操作规程(SOP)

关键词：大鼠;肝移植

目的：建立大鼠肝移植模型

主体内容：

1.术前准备

材料

供体最好为200～250 g雄性大鼠，受体最好为250～300 g雄性大鼠。

肝下下腔静脉及门静脉袖套管采用输液管制成,袖套管提前作划痕以利于固定。胆管套管采用硬膜外管

显微器械一套

灌注液，保存液，肝素生理盐水

2.手术

取肝

供体术前不禁食,用10％水合氯醛3ml/ kg 腹腔注射全身麻醉。腹部垂直切口进腹，剑突向头端牵开;胸部垫以腰垫。右侧腰静脉远端细针穿刺注入含肝素25U 生理盐水2 ml。剪开镰状韧带，结扎左膈下静脉，顺时针方向游离肝周韧带。

结扎右肾动脉、右肾静脉及右肾上腺上静脉, 游离肝下下腔静脉。在左右肝管分叉下方1 cm 处楔形切开胆总管前壁,向近肝段插入胆管套管, 丝线结扎固定。

游离肝固有动脉暂不结扎。结扎幽门静脉。游离腹主动脉，静脉穿刺针穿刺,缓慢注入4 ℃乳酸林格液(内含肝素25 U/ml) 15 ml ,待肝脏颜色变浅时, 立即结扎并切断肝固有动脉于左肾静脉上缘切断下腔静脉,开放流出道,切断门静脉,剪开膈肌,剪断肝上下腔静脉并附带膈肌环,将肝脏放入4 ℃乳酸林格液中保存。

修肝

以下操作均在4 ℃冰浴中进行。用微血管镊穿过自制袖套管腔,夹住门静脉断端后拖出外翻于套管壁,在袖套划痕上结扎,同法处理肝下下腔静脉套管,注意勿使袖套管扭曲。经门静脉袖套管注入4 ℃乳酸林格液5 ml 冲出肝内残留血液。

将肝脏复位,沿肝上下腔静脉环形剪断膈肌,注意保留膈肌环的完整性,剪开膈肌环内隔膜少许以扩大肝上下腔静脉出口。在肝上下腔静脉右角8#0 血管缝线缝扎一针,作牵引用,左角部缝合带针血管缝线留作吻合肝上下腔静脉用。将肝脏置4 ℃乳酸林格液中保存。

植肝

术前12 h 禁食但不禁水,手术前30 min 肌注阿托品0. 03 mg ,氯胺酮100 mg/ kg 肌注全身麻醉。腹部正中切口上至剑突,左右侧腹壁各作2 根牵引线将腹壁牵开。湿纱布覆盖肠管。在右肾静脉上缘平面游离肝下下腔静脉,穿牵引线,结扎切断右肾上腺上静脉,游离肝周韧带,结扎左膈静脉,充分游离肝上下腔静脉,带牵引线。

结扎切断左肝至食管血管,游离胆总管,在分叉处切断,将远端胆总管翻向下方,游离切断肝固有动脉,在幽门静脉水平上方游离门静脉,大鼠面罩吸氧,依次贴肝用微血管夹阻断门静脉及肝下下腔静脉,在门静脉分叉处穿刺,注入常温生理盐水2～3ml ,驱除肝脏内血液,用小Satinsky 钳阻断肝上下腔

静脉,近肝切断肝上下腔静脉、门静脉及肝下下腔静脉,移去原肝。

将供肝自4 ℃冰浴中取出,原位放入肝脏腔隙内,将供肝左侧8#0 血管缝线与受体肝上下腔静脉左侧角缝合,结扎,连续缝合腔静脉后壁,至右侧角时与供肝右侧牵引线打结,再作腔静脉前壁连续缝合至左侧角,生理盐水冲洗血管腔排出气泡,与线尾打结,完成肝上下腔静脉吻合。经门静脉袖套管注入常温生理盐水2 ml ,排出供肝内冷灌注液,微血管夹夹闭供肝肝下下腔静脉

。将阻断受体门静脉的微血管夹下移至幽门静脉水平,排出门静脉内血液及血块,冲洗血管腔,迅速插入供体门静脉袖套管,用5#0 丝线结扎,移去门静脉微血管夹及肝上下腔静脉Satinsky 钳,供肝恢复血流,结束无肝期,供肝胆管内有胆汁流出。

将受体肝下下腔静脉微血管夹下移至右肾静脉上缘,去除下腔静脉内的血液及血凝块,肝素生理盐水冲洗后立即插入供肝肝下下腔静脉袖套管,5#0 丝线结扎固定。将胆总管支架管插入受体胆总管管腔内,5#0丝线结扎,大网膜覆盖,腹腔内注入含青霉素20 万单位的温生理盐水2 ml ,关腹。术后给予复温,完全清醒后2ｈ自由进糖水,术后第1 天自由进食。