免疫细胞化学常用试剂介绍（3）

一、粘附剂

在免疫细胞化学工作中，由于标本（如切片）的脱落常影响工作的质量的速度，故粘附剂的选择和使用就显得较为重要。

1、铬矾明胶液

试剂：铬矾　　　　　　　 　0.5 g

　 　 明胶（Gelatine）　　　 5 g

　 　 H2O　　　　　　　　　 ~1000 ml

方法：在1000 ml的烧杯或烧瓶中，以500～800 ml H2O加温溶解明胶，待其完全溶解后，再加入铬矾。注意温度过高易使明胶烧糊，包被玻片时最好控制水温在70 ℃。如有明显残渣，过滤后使用。

2、甲醛-明胶液

试剂：40%甲醛　　　　　　2.5 ml

　 　明胶　　　　　　　　0.5 g

　　 蒸馏水　　　　　　　至100 ml

配制方法：用少许蒸馏水（约80 ml）加热溶解明胶，待完全溶化后，加入甲醛，最后补充蒸馏水至100 ml混匀即可。

3、多聚赖氨酸（Poly-L-Lycine,PLL）

试剂：多聚赖氧酸　　　　　 5 g

　　蒸馏水　　　　　　 ~1000 ml

配制方法：称取PLL，溶于H2O，充分混合即可，此液浓度为0.5%，可适当稀释配成0.01～0.5%浓度。4 ℃保存，也可-20 ℃备用。PLL可反复冰冻，效果无明显影响，工作液常再稀释10～50倍。

4、Vectabond试剂　　该试剂是Vector公司新进推出的一种新型玻片粘附剂。该试剂与一般的粘附剂不同，它是通过对玻璃表面起化学修饰作用，改变其表面的化学物理特性，使组织切片牢固地贴于玻璃片上，贴上后不易脱落，保留时间较久。

一个试剂盒（7 ml）可配成350 ml工作液（用丙酮配）。处理载玻片前（事先酸处理），用染色缸装好各种液体，按下列程序进行：

干净载玻片→丙酮5 min→Vectabond试剂工作液（7 ml Vectabond+ 350 ml丙酮）：将载玻片用镊子夹住浸入Vectabond试剂1～2次→dH2O，2×5 min→干燥（37 ℃过夜）→用铝箔包好，室温存放备用。

注意：避免污染（尘埃等）；综上述方法处理的载片一般可存放半年以上。

二、封固剂

1、甘油-TBS及甘油-PBS

配制方法：按比例将甘油和TBS（或PBS）充分混合后，置4 ℃，冰箱静止；待气泡排除后方可使用。

2、甘油-明胶（冻）

试剂：明胶　　　 10 g

　 　甘油 　　　　　　　12 ml

　　 蒸馏水　　　　　　 100 ml

　　 香草酚　　　　　　 少许

配制方法：称取1 g明胶于温热（约40 ℃）的蒸馏水中，充分溶解后过滤，再加入12 ml甘油混合均匀。少许香草酚是为了防腐。

3、液体石蜡　液体石蜡因含杂质少，很少引起非特异性荧光，故常用于荧光组化及免疫荧光法时标本的封固。

4、DPX

试剂：Distrene 　　　 10 g

　　 酸二丁　　　　　　 5 ml

　 　二甲苯　　　　　　　35 ml

DPX为中性封固剂，用于多种染色方法匀不易褪色，但组织收缩较明显，故应尽量使其为均匀的一薄层。DPX现有商品出售，可直接应用。若感过于粘稠，也可加少量二甲苯稀释后应用。注意：二甲苯不可加得太多，二甲苯挥发后，片子上出现许多干燥的空泡，影响观察，遇有这种情况，可用二甲苯浸泡掉盖玻后重新封固。