制备转化用的农杆菌菌液

准备：

1．灭菌 试管 400毫升细长烧杯2瓶，离心瓶4-6个（250ml）。

2．试剂：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶） Kan 1;1000，Rif1:500。

1/2MS 2%蔗糖（灭菌115度20分钟），Silwet在-20℃贮存。

3．步骤：

共转化农杆菌：于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10μl：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30小时，次日下午6点将已摇活的菌按（1：400）及750μl菌液转至汉300毫升YEP K50 Rif中培养28℃，300rpm约14小时，次日上午8点测OD值，用YEP Rif作为空白对照，当菌液达到OD600为1.5~3.0之内时。

可收集菌体于250ml离心瓶（灭菌）,4℃，4000g 离心10min 。用10%蔗糖（含0.02%silwet）稀释至OD600 约为0.8-- 1.0左右即，用10%蔗糖作对照。转化时将花在溶液中浸泡50s左右，于弱光下生长。

4．浇水：转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透。

（注意：选取上述配好的溶液2ml，充分打碎管底部的菌体，在将混匀的菌体溶入600ml溶液中，混匀后再加入Silwet(100%)120μl终浓度为0.02%）。

2．先将浇透水用于转化的苗子的夹全部剪掉，再用宽胶带把花盆的土封好。

3．转化的准备工作：2个400细长烧杯，宽胶带，记号笔，表等。

4．转化过程略，视苗的长势弱 0.8 Pa 3`，长势好的0.8 Pa 5`。

5．标记好，将转化好的苗平放于盒子内，上盖封口膜封好，避光培养24hrs 2天后，将植株立起正常培养，浇水，3天1次。