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细胞污染原因

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养细胞就像养孩子,甚至比养孩子还难。忘记是谁这么说了。上次一次性死了14瓶细胞,前后分析都是培养基污染了。然后换了新培养基,换了新的种子,开始长得不错,但今天看了一下,又污染了,培养基变浑浊。

我养的是HUVEC,8月4日从一个老师处取种子(8月3日复苏),他原先是用高糖DMEM培养的,而我用的是1640。在倒置显微镜下,细胞形态不是太好,而且有小黑点。我用1640换掉原先的DMEM培养基,5,6日两天还可以,只是细胞长得慢。但今天就污染了。养细胞真是不知道什么时候就污染掉了。决定把血清和培养基检测一下,看看是不是在这个环节上出问题了。可能还有别的问题,战友们多多指教。

应该是细菌污染,如果是霉菌的话,一般不会这么快,你前后用的是不是同一种培养液?如果是的话,立即停用。首先要排除培养液的问题,因为同时有14瓶细胞污染,培养液的问题比较大。

因此配制培养液后一定要做无菌试验,过滤时要注意滤膜本身及其安装是否有问题;其次,要排除培养液保存问题,比如,瓶盖有裂隙或者是盖子与瓶口不合,密闭性差,容易细菌污染。还有就是操作过程中出了问题,不注意无菌操作,消毒不严格,造成培养液的污染。

超净工作台、手的消毒,拿培养瓶时不要拿盖子及其周围,培养液开盖后要斜着放,瓶盖横放,盖口不要向上或向下,培养瓶等尽量放在工作台的中间等等。总之,关键是无菌及无菌操作,做到这两点应该不会出什么差错了。

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