DNA电泳带型原因分析及解决办法
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DNA跑完电泳后,需要进行带型分析,电泳图上的带型可能有出现许多状况。那么如何根据DNA电泳带型结果调整自己的实验呢?这里简单的做个介绍。
<center> <img alt="DNA电泳带型原因分析及解决办法" height="281" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/08/27/A1377590510.JPG" width="356" /></center>DNA电泳需要进行带型分析,在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此,对DNA带型做了相应的分析。带型原因分析解决办法弱带或无带上样的DNA量不够增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂 糖电泳灵敏度稍高DNA降解避免DNA。
带型 | 原因分析 | 解决办法 |
弱带或无带 | 上样的DNA量不够 | 增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂 糖电泳灵敏度稍高 |
DNA降解 | 避免DNA的核酸酶污染 | &NBS p; |
电泳时间过长,DNA跑出 | 减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度 | &NBS p; |
EB染色的DNA,紫外光源不合适 | 应用短波长(254 nm),增强紫外灯灵敏度 | &NBS p; |
DNA带缺失 | 小DNA带走出凝胶 | 减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度 |
分子大小相近的DNA带不易分辨 | 增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度 | |
DNA 变性 | 电泳前请勿高温加热DNA链,以20 mM NaCl Buffer稀释DNA | |
巨大DNA链,凝胶电泳不合适 | 在脉冲凝胶电泳上分析 | |
DNA带模糊 | DNA降解 | 避免核酸酶污染 |
DNA上样量过多 | 减少凝胶中DNA上样量 | |
所用电泳条件不合适 | 电泳时电压不应超过20 V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力 | |
DNA样含盐过高 | 电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐 | |
有蛋白污染 | 电泳前酚抽提去除蛋白 | |
DNA变性 | 电泳前勿加热,用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA | |
不规则DNA带迁移 | 对于λ/Hind III片段COS位点复性 | 电泳前加热DNA 65℃加热5-10分钟,然后在冰上冷却5分钟 |
电泳条件不合适 | 电泳电压不超过20 V/cm,温度<30℃,电泳缓冲液有足够的缓冲能力 | |
DNA变性 | 以20 mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳 |