叶绿体的分离与荧光观察

实验原理

组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法．一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状、密度、离心力及介质黏度等．

同一离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒沉降速率不同．依次增加离心力和离心时间，就能使非均一的悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，从而可分批收集各种亚细胞成分．

在等渗溶液中将叶绿体匀浆液在1000 r/min的条件下离心2 min，去除其中的组织残渣和未破碎细胞，再在3000 r/min的条件下离心5 min，即得沉淀的叶绿体．

实验用品

1 器材

离心机、组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片

2 材料

新鲜菠菜

3 试剂

0.35 mol/L氯化钠溶液

实验方法

（一）叶绿体的分离与观察

1 取新嫩菠菜叶，洗净檫干后去除叶梗和粗脉，称30 g于150 ml 0.35mol/L氯化钠溶液中，装入组织捣碎机；

2 利用组织捣碎机低速匀浆3-5 min；

3 将匀浆用6层纱布过滤于500 ml烧杯中；

4 取滤液4ml在1000 r/min下离心2 min，取上清；

5 上清液3000 r/min，离心5 min．去上清，沉淀即为叶绿体；

6 0.35 mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀；

7取叶绿体悬液1滴于载玻片上，加盖片：普通光镜下观察；

（二）菠菜叶徒手切片观察

新嫩菠菜叶斜切面1片

0.35 mol/L氯化钠溶液1滴

加盖片轻压：光镜下观察；