唾液淀粉酶活性观察实验的原理及方法
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酶是指化学本质为蛋白质的生物催化剂。在一定条件下，酶促化学反应进行的能力即称为酶活性(酶活力)。影响酶活性的因素是多方面的，如温度、PH及某些化学物质等都会影响酶的催化活性。
酶活性通常是通过测定酶促化学反应的底物或产物量的变化来进行观察的。
本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化因素影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶。淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。
而碘液能指示淀粉的水解程度——淀粉遇碘可呈紫色、暗褐色与红色，而麦芽糖与葡萄糖遇碘则不呈颜色反应，如图所示：
1. 0.5%(W/V)淀粉溶液：称取0.5g可溶性淀粉，加少量预冷的蒸馏水，在研钵中调成糊状，再徐徐倒入约90ml沸水，同时不断搅拌，最后加水定容为100ml即成。要求新鲜配制。
2. 稀碘溶液：称取1.2g I 2 、2g KI，加少量蒸馏水溶解后，再加蒸馏水至200ml。保存于棕色瓶中，用前5倍稀释。
A液—0.2mol/L Na 2 HPO 4 溶液：称取35.62g Na 2 HPO 4 ·12H 2 O，将之溶于蒸馏水后定容至1000ml。
B—0.1mol/L柠檬酸溶液：称取19.212g无水柠檬酸，将之溶于蒸馏水后定容至1000ml。
1) PH5.0缓冲液——取A液10.3ml、B液9.7ml混合而成。
2) PH6.8缓冲液——取A液14.55ml、B液5.45ml混合而成。
3) PH8.0缓冲液——取A液19.45ml、B液0.55ml混合而成。
4. 0.5%(w/v)蔗糖溶液：称取蔗糖0.5g，将之溶于蒸馏水后定容至100ml。
A液—称取无水CuSO 4 17.4g，将之溶于100ml预热的蒸馏水中，冷却后用蒸馏水稀释至150ml。
B液—称取柠檬酸钠173g、Na 2 CO 3 100g，再加蒸馏水600ml，加热溶解后冷却，用蒸馏水稀释至850ml。
6. 1%(w/v)NaCl溶液：称取NaCl 1g，将之溶解后用蒸馏水稀释至100ml。
7. 1%(w/v)CuSO 4 溶液：称取无水CuSO 4 1g，将之溶解后用蒸馏水稀释至100ml。
3) 口含约20ml蒸馏水，做咀嚼动作1~2min，以分泌较多的唾液。然后将口腔中的唾液吐入一个干净的小烧杯中。
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穴号 试剂(滴) |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
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蒸馏水(ml) |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
弃去 |
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唾液 [注2] (滴) |
2→ |
2→ |
2→ |
2→ |
2→ |
2→ |
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0.5%淀粉溶液(ml) |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
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碘液 [注3] (滴) |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
观察结果(颜色)，以呈棕红色者浓度为准，稀释原唾液作应用液。
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试管编号 |
1 |
2 |
3 |
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0.5%淀粉(ml) |
5 |
5 |
5 |
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PH6.8缓冲液(ml) |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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稀释唾液(ml) |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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不同温度(℃) |
置冰水浴中 |
置37℃水浴中 |
置沸水浴中 |
将各管中的试剂加好后混匀，然后及时在上述温度下分别进行处理。
3) 每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。
4) 待第2支试管中的反应液与比色板孔穴的碘液混合后颜色不再变化时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1~3滴。
摇匀后观察并记录各管颜色，比较管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响。
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管号 |
1 |
2 |
3 |
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0.5%淀粉(ml) |
2 |
2 |
2 |
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不同PH的缓冲液(ml) |
PH5.0 PH6.8 PH8.0 |
2 |
— |
— |
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— |
2 |
— |
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— |
— |
2 |
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稀释唾液(滴) |
10 |
10 |
10 |
2) 每隔1min从PH6.8的试管中取出1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴，观察其颜色变化。
3) 待颜色呈棕色时，向各管中加稀释碘液1~3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，解释PH对酶活性的影响。
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试管号 |
1 |
2 |
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0.5%淀粉(ml) |
2 |
— |
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0.5%蔗糖(ml) |
— |
2 |
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稀释唾液(ml) |
1 |
1 |
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管号 |
1 |
2 |
3 |
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0.5%淀粉(ml) |
3 |
3 |
3 |
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PH6.8缓冲液(ml) |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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1%NaCl溶液(ml) |
— |
1 |
— |
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1%CuSO 4 溶液(ml) |
— |
— |
1 |
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蒸馏水(ml) |
1 |
— |
— |
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稀释唾液(ml) |
1 |
1 |
1 |
3) 每隔1min从第1支试管中取出1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴于此滴反应液中，观察其颜色变化。
4) 待加碘后颜色呈棕色时，取出3支试管，分别加入稀碘液1~3滴。观察、比较各管颜色的深浅，并解释之。
3. 在往白磁板的孔穴内依次加完蒸馏水、稀释好唾液并且加完淀粉溶液之后，加入碘液之前，应放置5min。
