种子发芽率的快速测定

种子发芽率的快速测定

　　种子发芽率是指在最适宜条件下，在规定天数内，发芽的种子占供试种子的百分数。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。但是常规方法（直接发芽）测定发芽率所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。快速测定法则能在较短时间内获得结果。

Ⅰ．氯化三苯四氮唑法（ TTC法）

原理

　　凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命省略的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH2 或NADPH2 ）上的氢还原时，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTF）。

仪器药品

　　恒温箱 　　　烧杯

　　培养皿 　　　镊子

　　刀片 　　　　天平

　　0.5% TTC溶液：称取0.5g TTC放在烧杯中，加入少许95%乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。溶液避光保存，若变红色，即不能再用。

操作步骤

　　1．浸种

　　将待测种子在30─35℃温水中浸种（大麦、小麦、籼谷6─8小时，玉米5小时左右，粳谷2小时），以增强种胚的呼吸强度，使显色迅速。

　　2．显色

　　取吸胀的种子200粒，有刀片沿种子胚的中心线纵切为二半，将其中的一半置于2只培养皿中，每皿100个半粒，加入适量的0.5% TTC，以覆盖种子为度。然后置于30℃恒温箱中0.5─1小时。观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。

　　将另一半在沸水中煮5分钟杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。

　　3．计算活种子的百分率，如果可能的话与实际发芽率作一比较，看是否相符？

Ⅱ．溴麝香草酚蓝法（ BTB法）

原理

　　凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的O2 ，放出CO2 。CO2 溶于

增加，可用溴麝香草酚蓝（BTB）来测定酸度的改变。BTB的变色范围为pH6.0─7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。色泽差异显著，易于观察。

仪器药品

　　恒温箱　　　 天平

　　培养皿　　　 烧杯

　　镊子 　　　　漏斗

　　滤纸　　　　 洋菜

　　0.1%BTB溶液：称取BTB0.1g，溶解于煮沸过的自来水中（配制指示剂的水应为微碱性，使溶液呈蓝色或蓝绿色，蒸馏水为微酸性不宜用），然后用滤纸滤去残渣。滤液若呈黄色，可加数滴稀氨水，使之变为蓝色或蓝绿色。此液贮于棕色瓶中可长期保存。

　　1%BTB琼脂凝胶：取0.1%BTB溶液100ml置于烧杯中，将琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒在数个干洁的培养皿中，使成一均匀的薄层，冷却后备用。

操作步骤

　　1．浸种

　　 同上述TTC法。

　　2．显色

　　取吸胀的种子200粒，整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中，种子平放，间隔距离至少1cm。然后将培养皿置于30─35℃下培养2─4小时，在蓝色背景下观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。

　　用沸水杀死的种子作同样处理，进行对比观察。

　　3．计数种胚附近出现黄色晕圈的活种子数，算出发芽率。

Ⅲ ．红墨染色法

原理

　　凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的种胚细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料便能进入死细胞而染色。

仪器药品

　　1．浸种

　　同上述TTC法。

　　2．染色

　　取已吸胀的种子200粒，沿胚的中线切为两半，将一半置于培养皿中，加入5%红墨水（以淹没种子为度），染色10梍15分钟（温度高时间可短些）。染色后倒去红墨水，用水冲洗多次，至冲洗液无色为止。检查种子死活，凡种胚不着色或着色很浅的为活种子；凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。可用沸水杀死的种子作对照观察。

　　3．计数种胚不着色或着色浅的种子数，算出发芽率。

Ⅳ．纸上荧光法

原理

　　具有生活力的种子和已经死亡的种子，它们的种皮对物质的透性是不同的，而许多植物的种子中又都含有荧光物质。利用对荧光物质的不同透性来区分种子的死活，方法简单，特别是对十字花科植物的种子，尤为适用。

仪器药品

　　紫外荧光灯　　 培养皿

　　镊子　　　　　 滤纸（无荧光）

操作步骤

　　1．将完整无损的种子（油菜、白菜等十字花科植物的种子100粒，于25─30℃水中浸泡2─3小时。

　　2．把已吸胀的种子，以3─5mm间隔整齐地排列在培养皿中的湿滤纸上，滤纸上水分不能过多，以免荧光物质流散彼此影响。培养皿可以不必加盖，放置1.5─2小时，取去种子，将滤纸阴干。取出的种子仍按原来顺序排列在另一培养皿中（以备验证）。

　　3．将阴干的滤纸置于紫外荧光灯下进行观察，观察如能在暗室中进行，则效果更好。

　　4．在放过种子的位置上如见到荧光圈，则为死种子。如要确证它们是死种子，可将排列在另一培养皿中的这些种子拣出来，集中在一只培养皿的湿滤纸上，而让不产生荧光圈的种子留在培养皿中，维持湿度，让其自然发芽。

　　5．3─4天后记录培养皿中发芽种子数，填入下表中。

　　此方法的成败，首先决定于种子中荧光物质的存在，其次决定于种皮的性质。有些种子无论有无发芽能力，一经浸泡，即有荧光物质透出，大豆即属此类；

也有些种子由于种皮的不透性，无论种子死活，都不产生荧光圈，许多植物的种子都会碰到这种个别现象，此时只有用机械方法擦伤种皮，可重行验证。相反，有时由于收获时受潮，种皮已破裂，也会产生荧光圈，试验时都应该注意。最好将浸泡液进行检查，没有荧光则适于作试验材料。