Miltenyi磁柱选择及标记问题

（主要针对Miltenyi产品）

一、标记策略

用MACS进行磁分离，最重要的参数就是高质量的标记。对阳性细胞的标记应尽可能强，而背景要尽可能低，才能获得对磁标记的阳性细胞和未标记的阴性细胞的最好分辨。有多种不同的标记策略可供参考：

1、直接标记

直接标记是最快速和最特异的磁标记方法。

2、间接标记

几乎所有的单克隆抗体或多克隆抗体都可以用于间接标记。用无标记的、生物素化的或FITC、PE或APC结合的一抗标记细胞，再用抗免疫球蛋白、抗生物素、链霉菌亲和素、抗FITC、抗PE、或抗APC的微珠分别进行磁标记。间接标记可以放大磁标记，用于分离表达比较弱的标记很有用。在间接标记中，以使用生物素化的或PE表记的一抗结果特异性最好。

二、磁分离柱的选择

下表为德国Miltenyi公司的分离柱种类，其中MS, LS, XS柱适合于正性细胞选择，如果磁标记很强，也可用于负性选择。Large Cell Columns与MS柱相比，孔径较大，适合于人和动物大细胞的正性选择，如巨核细胞。

新的LD柱是为最方便的负选设计，代替了AS 和BS柱。LD 柱和CD及D柱即使在磁标记很弱的情况下也能获得最高的负选效率。µ 和M柱是为分子生物学方面的应用而设计的。

三、分选策略

分选策略也要根据实际情况进行选择

1、正性选择（positive selection）

磁珠对细胞功能和活力的影响很小，因此一般首先应该考虑正选策略。正选具有速度快和单克隆抗体的特异性优势，大多数情况下，正选省时省钱。

2、负性选择（negative selection）

如果正选策略不适合您的实验，比如有可能因抗体结合引起细胞活化或没有针对靶细胞的特异性抗体，可以选择负选策略。MACS对许多细胞类型提供了合适的试剂盒，含有滴定好的针对非靶细胞的混合抗体。