SDS裂解法提取大量质粒

本法的产量低得多，但却比其他方法更温和，是提取大质粒（大于15kb）的首选方法。

试验步骤：

1. 将500ml细菌沉淀物洗过后重悬于10ml用冰预冷的10%蔗糖、50mmol/L Tris.Cl(pH8.0)溶液中，将悬液移至30ml的带盖螺口塑料试管中。

2. 加入2ml新配制的溶菌酶溶液[10mg/ml,溶于10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)]。当溶液的pH值小于8.0时，溶菌酶不能有效地发挥作用。

3. 加8ml 0.25mol/L EDTA(pH8.0), 将管倒置数次以混匀悬液， 在冰上放置10min。

4. 加4ml 10% SDS，用玻棒迅速混匀内容物，使SDS均匀分散到整个细菌悬液中，操作应尽可能温和小心，以便最大限度地避免释放出来的DNA受到剪切。

5. 立即加入6ml 5mol/L NaCl（终浓度为1mol/L）， 再次用玻棒温和彻底地混匀内容物，在冰上放置至少1h。

6. 以4℃[用Beckman Ti50型转头（或与其相当的转头）]，30 000rpm离心30min，小心将上清转移到一个50ml的一次性塑料离心管中，弃去沉淀物。如果细菌碎片未能全部除尽，可用35 000rpm再离心20min，将上清转移到另一管中，去掉存在离心管内的粘稠状液体。

7. 上清分别用酚/氯仿和氯仿各抽提1次。

8. 将水相转移到250ml的离心瓶中，于室温加入2倍体积的（约60ml ）乙醇，充分混匀，室温下放置1-2h。

9. 以4℃，5000rpm离心20min，回收核酸。

10. 离心管倒置于纸巾上，使最后残存的乙醇流干，在真空干燥内短时间干燥沉淀物，但不要使之完全干燥。

11. 用3mlTE(pH8.0)溶解DNA。