流式细胞术测血浆中微粒标本处理方法问答

1、用流式细胞术测血浆中的内皮源性微粒，已购买荧光标记的抗体（PE ANTI -CD144),已文献证实这种微粒表面表达CD144，且具有特异性。但检测了两次均无特异性，不知道是否标本处理有问题。

回答：EMP；CD31、CD42。

2、抗体已经买了，还是想用CD144做，据说CD144特异标记内皮源性微粒（EMP).你们有过用CD31.CD42标记的经验吗？标本是怎麽处理的？对流式细胞技术上有什麽要求？

因为EMP大小在1um左右，所以FS的消减滤片最好在检测时取掉，在此基础上还要将默认的检测触发信号（FS PEAK）阈值（discrimination）作相当大的下调（例如机器就是将默认100下调到25～35），否则有可能收不到多少信号。

流式检测环节来说，因为EMP比一般的细胞直径小了一个数量级，所以其散射光信号很弱，如果常规通过消减滤片并且采用默认触发信号阈值的话，可能很大部分（或者绝大部分）EMP过来的散射光都没有办法触发检测系统的获取过程，所以就没有信号了。

其实EMP的检测一般的流式细胞仪都能完成，没有必要对仪器本身失去信心。关键是要跟操作员沟通好，反馈一下，操作员应该能够理解和进行调整的，毕竟插拔一块滤片是易如反掌的事情，调整阈值参数就更加简单了。

3、和操作员沟通 ，她说消减滤片她们不会取。她们一般不会动机器上的部件。她答应再帮忙做一下。并说想看一下图。机器的型号待问。

以1um乳胶微球标示大小范围

MP（包括EMP和PMP）大小位置

特异抗体染色检测：

4、机器的型号是BECTON DICKSON FACsort 应当怎样调整?

很不幸，咨询过BD和BC两个公司的应用工程师了，FACsort的前向消减滤片是固定而非可插拔的，而且封在模块内部，基本上不合适取下来了。在不取掉前向消减滤片的情况下，FS PEAk阈值降到0都没有办法触发有效的目标信号，徒增背景噪音而已，没戏了。作者 现在在用的机型 BC的ALTRA。

5、机型分别是BD LSR2,和BECTON DICKINSON FACSCalibur 。能做吗?

BD的机器似乎只有最新的Aria的前向消减滤片是可以自由取下来的，其它机型可能都不可以。保险的做法先问问那些单位的操作员，前向消减滤片可否取下，这是最关键的，可以的话参数调节就应该都没有问题的。