出血热病毒标本采集及处理方法

采集样品的目的是分离病毒，检测病毒核酸和抗体。样品包括人、媒介动物和媒介昆虫。

器材：

血液、咽喉冲洗液及其他体液、组织、蜱、蚊子等。

试剂：

① ELISA

② 10％ 的牛血清缓冲液

出血热病毒标本采集及处理方法的基本过程可分为如下几步：

（一）患者样品

A 血液 分离病毒和检测核酸的血液样品要在发病的急性期内采集，检测抗体要采用急性期和恢复期双份血清。样品要在干冰、液氮中运输，没有干冰和液氮时可以用冰运输。血液抗凝剂的选择要根据实验的方法决定。EDTA 干扰 ELISA，肝素能抑制 PCR 反应，枸橼酸盐抗凝剂干扰免疫荧光，枸橼酸盐和草酸盐在细胞培养时形成非特异病变影响病毒病变的观察。

B 咽喉冲洗液及其他体液 沙粒病毒如 LASV 和 MACV 可以从发病后数周的患者咽喉冲洗物分离到，但很少从尿液分离到。丝状病毒也可以从患者发病后几周的咽喉冲洗物、唾液、尿液和精液中分离到。冻存前咽喉冲洗液和尿液应该和 10％的牛血清缓冲液混合。

C 组织 组织可以用甲醛固定，以便作组织化学染色。组织切片可以用丙酮固定作免疫荧光或 ELISA 检测。

（二）媒介动物样品

出血热病毒多致人兽共患病，大动物如牛羊可以采血分离和检测病毒。小的野生动物，尤其是啮齿类动物可以采用布夹捕获或用笼子诱捕。死亡的小动物可以取其脾脏和肺脏检测病毒，心血检测病毒抗体。

A 蜱的收集 在有动物活动的草地采集未吸血的蜱，如放羊的草地或野生动物活动的地区。用 1㎡的白布旗子在草地上扫动几次，检查旗子并用镊子收集旗上的蜱，将蜱放在试管或小玻璃瓶中带回实验室，在容器内放入滤纸片滴入微量水保持湿度。也可用拖旗法，在草地上拖着旗子走动收集蜱。在草地采集蜱要避开雨后和早晨的潮湿时间及中午高温的时候。要穿防护衣或白色袜子及白色长腿裤子，将裤子扎入袜子中，以防蜱钻入裤子中。

蜱有二氧化碳感受器，在动物或者人接近时，因能感受到空气中二氧化碳浓度的微弱变化，蜱会作好攻击的准备。利用蜱对二氧化碳敏感的特性，我们可以用干冰吸引来捕捉蜱。这一方法主要用于不适于旗子收集蜱的地方，如丛林地区。

亦可在动物身上采集吸血的蜱。

将蜱根据形态学或分子生物学分类、分组。我们可以从蜱分离细菌和病毒或用其核酸检测细菌或病毒。蜱可以用来分离和检测发热伴血小板减少病毒和新疆出血热病毒。

B 蚊子的收集 蚊子是靠人体发出的二氧化碳和汗液中的丙酮气息找到人的。当它们感觉到二氧化碳气体流时立刻向这股气流飞去。根据蚊子对二氧化碳敏感的特性我们可以用二氧化碳诱蚊灯收集蚊子。二氧化碳诱蚊灯能释放出二氧化碳气流，模拟人体发出的二氧化碳潮湿气息，诱使蚊子飞来，风机搅动周围空气形成涡流，使习惯随气流而飞的蚊子随风被吸进捕捉窗。收集蚊子要根据蚊子的种类和活动时间在其活动地区，用二氧化碳诱蚊灯收集。对收集的蚊子进行形态学或分子生物学分类，进行病毒分离和检测。