糖尿病血管病变动物模型制作

目前中医药治疗NIDDM 的实验研究, 大多借用链脲佐菌素(St repozotocin , 简称STZ)或四氧嘧啶所致的糖尿病大鼠模型,其特点是胰岛素分泌缺乏所致的高血糖和“三多一少症”(多饮、多食、多尿、消瘦) ,与人类胰岛素依赖型糖尿病( IDDM) 相似,而与NIDDM的病理特征和临床特点相差甚远。

实验性性NIDDM 大鼠模型具有Ⅱ型糖尿病的临床特点和病理特征, 尤其是存在受体和受体后缺陷所致的胰岛素抵抗的特征, 是实验研究中医药改善胰岛素抵抗作用的较好载体。

主要试剂与设备: STZ , 胶原酶(Collagenase type Ⅱ) , 海胺(Benzethonium

Hydroxide) 均为SIGMA 公司产品; 牛血清白蛋白(Albumin Bovine) 为Amresco 公司产品, D - [ U - 14C] 葡萄糖[ 1mmol/ L含U - 14 C 9. 176 GBq (即248mCi) ] 购自中国医学科学院放射医学研究所。Beck2manLsl801 液体闪烁谱仪与倒置生物显微镜XSZ - D2。

实验动物与饲料加工: 雄性SD大鼠(体重160g 左右) 100 只, 基础鼠料总热量6. 941 J / g (蛋白质占23 %、碳水化合物占53 %、脂肪占5 %) , 均购自广东省医用动物场。肥甘饮食(高热量饲料) 由基础鼠料加蔗糖、炼猪油和鸡蛋充分混匀后,用搅肉机成形、烤熟后用, 其总热量为21. 33J / g , 其中蛋白质占15 %、碳水化合物占51 %、脂肪占25 %。

造模方法: 基础鼠料喂养1 周后, 将健康活泼SD 大鼠随机分为两组。造模组75 只, 按30mg/ kg 体重的剂量腹腔内注射STZ (溶于0. 1 mol/ L 柠檬酸缓冲液, pH 4. 4 ) 每d1 次, 连续3 次; 正常组25 只, 腹腔内注射等体积的柠檬酸缓冲液。

造模组在末次注射2 周后, 挑选空腹血糖≥11. 1 mmol/ L 大鼠改喂肥甘饮食; 正常组仍喂基础鼠料。造模期间观测体重、摄食量、饮水量及外观形态的变化, 造模前、肥甘饮食前及造模条件结束时, 大鼠均禁食12h 后空腹眼眶静脉窦采血检测血糖、血脂三项和血清胰岛素(分别由我校第一附属医院检验科和校核医学研究室检测) 。

持续喂养肥甘饮食10 周后, 于上午分批迅速将大鼠断头处死。