亚急性衰老动物模型制作方法

基本原理：在一定时间内连续给动物注射D-半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增高，在醛糖 还原酶 催化下，还原为半乳糖醇，这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内，影响正常渗透压，导致细胞肿胀，功能障碍、代谢紊乱，破坏并消耗机体抗氧化防御系统，使自由基积聚。同时在半乳糖还原成半乳糖醇的过程中又产生（O2-），这样使细胞膜脂质受损，过氧化脂质、脂褐质等增高，出现衰老。
操作步骤：
取健康雌性小鼠，普通饲料常规喂养。模型组小鼠每天颈背部皮下注射D-半乳糖（0.25ml/10g），连续6～8周后，小鼠行动迟缓，毛色灰暗，形体瘦弱，呈现明显的衰老体征，即造成亚急性衰老模型。空白对照组同样每天皮下注射生理盐水（0.25ml/10g）。末次给药和D-半乳糖2h后，进行学习记忆训练实验（避暗实验），次日测定记忆成绩，然后眼眶取血后处死。取小鼠胸腺、脾、脑、肝和心脏组织，测定各项衰老指标。
避暗实验（step through test）：反射箱分单独5个箱，每个箱大小为36cm×12cm×12cm ，分明暗两室。明室由透明有机玻璃构成，暗室底部安铜栅，通以36V电流，明暗两室之间有一直径为3cm洞口，反射箱通过连线与微机连接，由微机控制记录动物从明室通过洞口进入暗室的潜伏期。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室，同时开始计时,动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时自动停止。取出小鼠，记录小鼠从明室入暗室的潜伏期和5min内的电击次数，此为训练成绩。24h后再测为测试成绩。
测定指标：
1、体重
2、脏器指数（胸腺、脾、肝和脑的脏器指数）
脏器指数=脏器重量/体重×100%
3、抗氧化指标
血液：MDA、SOD和MAO
肝和脑：MDA
脑：MAO
注意事项：
1、选择雌性小鼠，因实验周期长，雄性鼠长期群居，好咬斗易造成受伤影响实验结果。
2、注射给药必须无菌操作，鼠笼垫料与饮水壶定时换洗，保持清洁，因给药时间较长，机体逐渐老化，功能状态渐差。