蛋白质、多肽的放射性核素（125I）的标记氯胺T法（ch-T法）
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【基本原理】
反应原理不清楚，仅仅是建立在实验基础上，有的学者认为当氯胺T溶于水后释放出次氯酸，将_I~F_离子氧化成_I2_、_I~D_，在pH为7.0-8.0条件下与蛋白质酪氨酸残基上邻位氢原子发生置换反应，形成放射性碘标记化合物，用偏重亚硫酸钠终止氧化反应，经过分离纯化，获得纯的标记化合物。
【试剂及材料】
（1）0.05mol/L和0.1mol/L，pH7.4 磷酸缓冲液(PB)
（2）氯胺T溶液：用0.05mol/L pH7.4 PB配制成1mg/ml，新鲜配制，即配即用。
（3）偏重亚硫酸钠溶液：用0.05mol/L pH7.4 PB配制成2mg/ml，新鲜配制。
（4）KI溶液：用0.05mol/L pH7.4 PB配制成2mg/ml。
（5）待标记的蛋白质或多肽：用0.05mol/L pH7.4 PB配制成1mg/ml。
（6）Na125 I溶液（3.7GBq/ml）
（7）分离柱和Sephadex G50凝胶
（8）0.05mol/LpH7.4 磷酸盐缓冲液(PBS)
（9）放射性薄层扫描仪和活度计
【操作方法】
（1）取50ml 0.1mol/L，pH7.4 PB，加入有盖反应瓶；
（2）加入待标记的蛋白质或多肽5ml；
（3）加入Na125 I溶液5ml；
（4）加入氯胺T溶液20ml∽50ml，反应2min；
（5）加入偏重亚硫酸钠溶液20ml∽50ml，反应1min；
（6）加入2%的KI溶液，稀释残留的碘化物；
（7）取少量反应液，点在Whatman 1# 纸上；
（8）在正丁醇：乙醇：氨水=5：1：2系统中进行层析，凉干后，在放射性薄层扫描仪上测量三个峰，并计算碘利用率；
（9）将反应液过Sephadex G50柱（Sephadex G50制柱：取1g Sephadex G50在0.05mol/L pH7.4 PBS中浸泡24h以上其间多次轻轻摇动漂去细小颗粒，待其充分膨胀后，抽气减压约30min，排出其中气泡；然后将凝胶加入玻璃层析管中，使其自然下降。）。
柱预先用0.05mol/L pH7.4 PBS平衡，在用BSA 20mg(溶于1ml0.05mol/L，pH7.4 PBS中)过柱，使柱饱和，用20ml0.05mol/L pH7.4 PBS流洗后即可上样，洗脱后，收集洗脱液2ml/瓶；
（10）分别在活度计上测量并绘制曲线，合并蛋白峰，加入适量BSA和NaN3，分装冻存或冷冻干燥。
【质量鉴定】
（1）碘利用率（%）=C1¸（C1+C2+C3）´100%
（2）免疫活性（%）=C0¸Ct´100%
（3）比活度（Bq/mg）=A¸m
式中，C1，C2，C3分别为峰1，峰2，峰3的放射性计数率（cpm）；C0是用10倍的零标准抗体与标记抗原后复合物的放射性计数率；Ct为每管加入的标记的抗原总放射性计数率；A为放射性活度，是标记时加入的放射性碘的活度乘以碘利用率；m为蛋白质的化学量。
【注意事项】
（1）应严格控制反应温度、时间、体积和反应体系pH。
（2）125 I用量：125 I用量直接影响标记物的比活度，要根据所需标记物的比活度和碘利用率，预先计算出125 I用量。
（3）氯胺T用量：应通过预实验来确定氯胺T的用量。用量过高，虽然可以提高碘化率，但容易损伤标记物的免疫活性；用量过低，则标记比活度低。
