巨噬细胞吞噬功能测定―皮泡法
互联网
3768
[试剂及材料]
1. 斑蟊酊剂：取药用斑蟊以95％乙醇制成10％酊剂，室温下浸泡两周后使用。
2. 鸡红细胞（CRBC）悬液：取鸡血1～2ml，阿氏液抗凝（放4℃冰箱可保存2～4周）。试验前用无菌生理盐水洗3次，然后配成5％CRBC悬液。
3. Giemsa染色液
[操作方法]
1. 取1cm2 大小的滤纸片2张，蘸满斑蟊酊，置于一侧前臂皮肤上，在滤纸片上压一块稍大的塑料片，上面再敷以清洁纱布，固定；
2. 4～5h后，取下塑料片和滤纸，可见局部皮肤发红，表皮开始松动，用一拱型塑料盖将局部罩好，固定包扎以防止开始形成的水泡破裂；
3. 48h后，局部皮肤即形成一个完整的水泡。将皮肤消毒后，用无菌注射器小心抽取皮泡内渗出液，盛于无菌试管中；
4. 局部用消毒纱布敷盖，2d后取下纱布。此法病人无疼痛及任何不良反应。 斑蟊酊诱发的皮肤炎性渗出液有多有少，大多在1～2ml，最多的可达8ml。皮泡液中含MΦ数平均为30％～40％，最多可达80％；
5. 取皮泡渗出液0.5ml；加CRBC悬液0.01ml（CRBC数约为5～6×106 ）；
6. 混匀，置37℃水浴中30min，（每隔10min轻轻摇动一次）。1000r/min离心5min，弃上清，留少许液体将细胞充分混匀，涂片，甲醇固定，Giemsa染色（或G-W混合染色），油镜下观察并计数100～200个MΦ；
[结果分析]
吞噬细胞％：即100个MΦ中吞噬有CRBC的细胞数。
吞噬指数：将100个MΦ所吞噬CRBC的总和除以100，所得每个MΦ吞噬CRBC的平均数，即吞噬指数。
此外，在计数时，应同时注意CRBC被消化的程度分为4级：
Ⅰ级:未消化─胞质浅红或浅黄带绿色，胞核浅紫红色。
Ⅱ级:轻度消化─胞质浅黄绿色；核固缩，染成紫蓝色。
Ⅲ级:重度消化─胞质淡染，胞核呈浅灰黄色。
Ⅳ级:完全消化─MΦ内只见形状似RBC大小的空泡，边缘整齐，胞核隐约可见。
