巨噬细胞吞噬功能测定―皮泡法
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[试剂及材料]
1. 斑蟊酊剂:取药用斑蟊以95%乙醇制成10%酊剂,室温下浸泡两周后使用。
2. 鸡红细胞(CRBC)悬液:取鸡血1~2ml,阿氏液抗凝(放4℃冰箱可保存2~4周)。试验前用无菌生理盐水洗3次,然后配成5%CRBC悬液。
3. Giemsa染色液
[操作方法]
1. 取1cm2 大小的滤纸片2张,蘸满斑蟊酊,置于一侧前臂皮肤上,在滤纸片上压一块稍大的塑料片,上面再敷以清洁纱布,固定;
2. 4~5h后,取下塑料片和滤纸,可见局部皮肤发红,表皮开始松动,用一拱型塑料盖将局部罩好,固定包扎以防止开始形成的水泡破裂;
3. 48h后,局部皮肤即形成一个完整的水泡。将皮肤消毒后,用无菌注射器小心抽取皮泡内渗出液,盛于无菌试管中;
4. 局部用消毒纱布敷盖,2d后取下纱布。此法病人无疼痛及任何不良反应。 斑蟊酊诱发的皮肤炎性渗出液有多有少,大多在1~2ml,最多的可达8ml。皮泡液中含MΦ数平均为30%~40%,最多可达80%;
5. 取皮泡渗出液0.5ml;加CRBC悬液0.01ml(CRBC数约为5~6×106 );
6. 混匀,置37℃水浴中30min,(每隔10min轻轻摇动一次)。1000r/min离心5min,弃上清,留少许液体将细胞充分混匀,涂片,甲醇固定,Giemsa染色(或G-W混合染色),油镜下观察并计数100~200个MΦ;
[结果分析]
吞噬细胞%:即100个MΦ中吞噬有CRBC的细胞数。
吞噬指数:将100个MΦ所吞噬CRBC的总和除以100,所得每个MΦ吞噬CRBC的平均数,即吞噬指数。
此外,在计数时,应同时注意CRBC被消化的程度分为4级:
Ⅰ级:未消化─胞质浅红或浅黄带绿色,胞核浅紫红色。
Ⅱ级:轻度消化─胞质浅黄绿色;核固缩,染成紫蓝色。
Ⅲ级:重度消化─胞质淡染,胞核呈浅灰黄色。
Ⅳ级:完全消化─MΦ内只见形状似RBC大小的空泡,边缘整齐,胞核隐约可见。