破碎大量样品、低温破碎大量样品、破碎坚硬或韧性较强的样品时,人工手动研磨就成了实验猿的噩梦。当然,也有很多实验猿已经尝试过市面一些研磨机/超声波粉碎机,发现自己那顽固的样品依然无法被完全破碎/破碎过程损坏了目标成分而十分心塞。
特别地,一些尤其坚硬/韧性比较强的样品,或要求维持低温条件进行破碎提取的样品,需要结合液氮进行研磨,如:皮肤、硬骨骼、软骨、血管、结缔组织、种子等;使用普通机械研磨方法,很难既保证研磨破碎效果又保证样品一直处于低温状态,尤其是提取 RNA、酶等对温度敏感的物质时,低温状态的控制显得尤为关键。
以下破碎方法结合了仪器的使用,使高通量或低温破碎样品、提取内容物更便捷。文章最后分享了提取核酸和蛋白质的实验效果图。
注:由于样品的具体差异及实验要求的不同,下文数据部分请咨询厂家。
第一部分 破碎动物组织
1)样品:猪肌肉组织
2)仪器: Tissuelyser 多样品组织研磨机(品牌:上海净信);
耗材:**毫升离心管和直径**毫米的研磨钢珠
3)步骤:
a. 取**克左右肌肉组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干**毫升的研磨离心管中。
b. 每个试管中放入**颗直径**毫米的研磨钢珠和**µL trizol,分别盖紧管盖后,置入 24 孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。
c. 将 Tissuelyser 多样品组织研磨机的参数设置为**赫兹,研磨**秒,启动研磨器。
d. 研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的肌肉组织样品。
4)结果:
研磨后的效果如图 1,猪肌肉组织成很细腻的泥浆状,研磨效果良好。
图1 猪肌肉研磨对比第二部分 破碎植物组织
2)仪器: Tissuelyser 多样品组织研磨机(品牌:上海净信);
耗材:**毫升离心管和直径**毫米的研磨钢珠
3)步骤:
a. 取**克左右叶片组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干**毫升的研磨离心管中。
b. 每个试管中放入**颗直径**毫米的研磨钢珠,分别盖紧管盖后,置入 24 孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。
c. 将 Tissuelyser 多样品组织研磨机的参数设置为**赫兹,研磨**秒,启动研磨器。
d. 研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的叶片组织样品。
4)结果:
研磨后的效果如图 2,叶片组织成很细腻的泥浆状,研磨效果良好。顺带附上研磨黄豆(坚硬的植物种子)的研磨对比图。
图 2 水稻叶片研磨对比
第三部分 结合液氮使用研磨机
当样品死活无法破碎完全/样品傲娇要低温环境时,上海净信 Tissuelyser 多样品组织研磨机+液氮=问题轻松解决。以血管和植物叶片为例,具体操作方法如下:
血管:
取 0.1 克新鲜血管,用剪刀剪成若干小块,然后放入 2 毫升离心管中,加入 1 颗 6 mm 研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管放入液氮中冷冻 1 分钟左右或直到液氮不沸腾,然后放入机器处理 30 秒钟。取出样品管可见样品被破碎成乳白色粉末,然后加入提取缓冲液,可以进行接下来的后续提取,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃ 以下。
叶片:
取 0.2 克植物叶片,清洁叶片表面后放入离心管中,加入 1 颗直径 5 mm 不锈钢研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管和适配器放入液氮中冷冻 1 分钟左右或直到液氮不沸腾,然后取出放入研磨机器中机器处理 30 秒钟。
取出样品管可见叶片被破碎成绿色粉末,然后加入提取缓冲液,进行接下来的后续提取即可,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃ 以下。
第四部分 提取物分析图
后记
想入手这个神器,但又对研磨效果有所犹疑的小伙伴,现在上海净信部分研磨机产品可申请试用,是时候下手了。激动人心的还有,近期研磨机好价,试用爽了直接入手一台也是毫不含糊的。详情可致电 021-57790908 或 13761884588。