培养细胞常用固定剂和固定方法
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培养细胞常用固定剂和固定方法
培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。
1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10―20分钟，干燥。
2．甲醇 10‰甲醇固定5―20分钟，自然干燥。
3．丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强，抗原保存好，很少用于组织切片，常用于培养细胞和细胞涂片的固定，平时丙酮4℃低温保存备用，临用时，将载玻片插入冷丙酮内5～10分钟，取出后自然于燥。
4．乙醇 95％乙醇脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而固定时间不宜过长(2小时内)。乙醇使蛋白变性程度轻，固定后蛋白可再溶解，在染色中孵育时间长的情况下，抗原可流失，并减弱反应强度。
5．乙醚(或三氯甲烷) 与乙醇等量混合对组织穿透性极强，即使涂片上含较多的黏液，固定效果仍较好，是理想的细胞固定液。
培养细胞固定之后晾干可使细胞牢固地黏附在载玻片上，故对于容易脱落的细胞应延长晾干时间。晾干之后PBS漂洗3次，然后进行组织化学或免疫组织化学染色。
用于免疫组织化学的固定剂种类很多，不同的抗原和标本均可首选醛类固定液，如效果不佳，再试用其他固定液。选择最佳固定液的标准：一是能最好地保持组织细胞的形态结构；二是最大限度地保存抗原免疫活性和被检物不被丢失。一些含重金属固定液可用于组织化学标本的固定，但在免疫组织化学染色中禁用。
