考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量

管号 试剂	0	1	2	3	4	5
100μg/ml牛血清白蛋白溶液／mL	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0
蒸馏水／mL	1.0	0.8	0.6	0.4	0.2	0
考马斯亮蓝液／mL	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0

加入考马斯亮蓝G-250蛋白试剂后，摇匀，放置2min后，在595nm波长下比色测定，记录A 595 。

以各管相应标准蛋白质含量（mg）为横坐标、A 595 为纵坐标，绘制标准曲线。

2、样品测定

试管 中加自制蛋白质样品1.0mL ，再加入5.0mL考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置5min后，在595nm波长下比色，记录A 595 。

根据所测A 595 从标准曲线上查得蛋白质含量。

注意事项

（1） 如果测定要求很严格，可以在试剂加入后的5～20min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。比色反应需在1h内完成。

（2） 测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于 比色杯 壁上，实验证明此复合物的吸附量是可以忽略的。测定完后可用乙醇将蓝色的 比色杯 洗干净。