新型发光试剂ImmunoStar®Zeta的开发

互联网2012-12-10

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前言

日本和光纯药株式会社于2009年正式将免疫印迹高灵敏度发光试剂ImmunoStar®LD（code NO.290-69904等）投放市场。这种试剂的发光底物，使用了鲁米的诺衍生物L-012（8-Amino-5-chloro-7-phenylpyrido [3,4-d ] pyridazine-1,4-（2H , 3H ） dione Sodium Salt）。

L-012与鲁米诺相比，发光信号更强，性能更优异。然而，正因为ImmunoStar®LD与原有的免疫印迹用发光试剂相比发光信号更强，当抗体浓度没有达到最为合适的条件时，过强的信号会导致背景变得非常高，影响实验效果。

因此，日本和光新开发出了ImmunoStar®Zeta。这种试剂的发光底物同样使用了L-012，但是检测灵敏度及发光信号与ImmunoStar®LD相比都有所降低。

图1：L-012和鲁米诺的发光强度的比较

在同一条件下分别在0.2nmol/l过氧化物酶里添加0.5mmol/l底物（L-012和鲁米诺），使用酶标仪对发光信号进行检测。

ImmunoStar®Zeta的特点一

灵敏度适中，操作更容易。

在免疫印迹实验中，一般会选用灵敏度及发光信号最适合实验对象的试剂。将日本和光新上市的ImmunoStar®Zeta、低灵敏度型的ImmunoStar®系列试剂及高灵敏度型ImmunoStar®LD，与A公司“中飞克级灵敏度”的“发光试剂A”和B公司的“中低飞克级灵敏度”的“发光试剂B”进行比较。

ImmunoStar®Zeta与“发光试剂A”和ImmunoStar®系列试剂相比，信号更强，短时间曝光即可得到明显的条带。（图2）

另外，ImmunoStar®Zeta与“发光试剂B”的灵敏度及信号强度几乎一样，虽然检测灵敏度比ImmunoStar®LD的要低，但是可以明显看出ImmunoStar®Zeta将背景抑制在了较低的程度。（图3）

因此，我们可以将ImmunoStar®Zeta定位为在低灵敏度的ImmunoStar®系列试剂及高灵敏度的ImmunoStar®LD之间的中等灵敏度发光试剂。

ImmunoStar®Zeta的特点二

长时间持续发光

ImmunoStar®Zeta最大的特点就是其发光信号持续时间长。将ImmunoStar®Zeta与A公司的“发光试剂A”和B公司的“发光试剂B”就发光信号持续性进行比较。

在免疫印迹实验中，在同样条件下分别对三种试剂，进行初始曝光、一小时后及两小时后的曝光，并对试验结果进行比较。在初始曝光中，ImmunoStar®Zeta比“发光试剂A”的发光信号持续性强，与“发光试剂B”几乎相同。

但是经过一段时间后差距就产生了。（图4）使用LAS4000对样品FLAG-BAP(20ng)的发光信号进行分析，可以发现“发光试剂A”的发光强度急剧减弱，一小时后为初始发光时的12%，两小时后仅约为5%。

“发光试剂B”的信号强度则在一小时后衰减为初始发光的40%，两小时后衰减仅为25%。而ImmunoStar®Zeta在经过一小时后衰减约为88%，即使两小时后其信号强度仍能达到初始曝光时的77%，可见其发光持续性之长（图5）。

图5 各种试剂的发光持续性的比较

结语

新型发光试剂ImmunoStar®Zeta与ImmunoStar®LD相比，信号强度减弱、背景降低，操作更加容易。作为日本和光发光试剂系列中中等灵敏度发光试剂，ImmunoStar®Zeta和A公司的“中飞克级灵敏度”发光试剂拥有不同的检测灵敏度及信号强度，且与A公司发光试剂的发光信号在随着时间延长衰减程度不同，ImmunoStar®Zeta有较强的发光持续性，其发光信号也不会立即衰减，因此，操作人员在实验中不用过于匆忙，根据实验要求对曝光进行调整。