正常大鼠唾液腺上皮细胞的培养
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实验材料:
1. 新生大鼠唾液腺;
2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2;
3. 培养用液:DMEM培养液,添加10%的胎牛血清、5μg/ml胰岛素、10 ng/ml表皮生长因子、50 ng/ml氢化可的松、100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素。无Ca2+ 、Mg2+ 的D-Hanks液,使用时添加100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素;
4. 鼠尾胶原液:先吸取4ml鼠尾胶原溶液放入冰浴中的青霉素小瓶,加入0.5ml的10×DMEM培养基。混匀后,再加入浓度为0.34 mol/L的NaOH 0.1ml快速混合(鼠尾胶原液的配制比例,按鼠尾胶原液与10×DMEM及0.34 mol/L NaOH三者的体积比为8:1:1配制),并立即加到24孔培养板中(每孔0.8ml),于37℃下放置30min;
5. 将配好的鼠尾胶原溶液涂布在预先灭菌处理过的盖玻片上,使其凝固;
6. 将鼠尾胶原包被的盖玻片放入24孔培养板内,用D-Hanks液平衡1h,备用;
实验方法:
1. 在无菌条件下取出新生大鼠(10g)的腮腺或颌下腺组织,仔细分离腺体周围的结缔组织,用无Ca2+ 、Mg2+ 的D-Hanks液将腺组织冲洗干净;
2. 将腺体组织剪成1—2mm3大小的植块,洗净植块上的血液和粘液;
3. 按一定密度(即植块与植块之间相距2mm左右),将植块种植到包被有鼠尾胶原的盖玻片上;
4. 加入DMEM培养液。每周换液1次;
5. 细胞长满后,在细胞传代的过程中去除植块。