人抗磷脂酶A2抗体（Anti-PLA2R）酶联免疫分析（ELISA）

人 抗磷脂酶 A2 抗体（ Anti-PLA2R ） 酶联免疫分析（ ELISA ）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中 抗磷脂酶 A2 抗体（ Anti-PLA2R ） 含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中人 抗磷脂酶 A2 抗体（ Anti-PLA2R ） 水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的标准品和未知浓度的待检样品， 温育后，加入生物素标记的抗 IgG 抗体， 再与链霉亲和素 -HRP 结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。

TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 抗磷脂酶 A2 抗体（ Anti-PLA2R ） 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中人 抗磷脂酶 A2 抗体（ Anti-PLA2R ） 浓度。

试剂盒组成

标本要求

1 ． 不能检测含NaN3的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

2． 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于-20 ℃保存，但 应避免反复冻融

操作步骤

1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

2. 加样： 分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、 待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50μl ，在样本反应孔中先加入待测样品 10μl 再加入样品稀释液 40μl （样品最终稀释度为 5 倍），盖上封板膜，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 45 分钟。

3. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 4 次，拍干。

5. 加生物素标记的抗 -IgG 抗体：每孔加入生物素标记的抗 -IgG 抗体 50μl （空白孔除外） 。 37 ℃温育 30 分钟

6. 洗涤：操作同 4 。

7. 加链霉亲和素 -HRP ：每孔加入 50μl 的链酶亲和素 -HRP （空白孔除外），轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 30 分钟。

8. 洗涤：操作同 4 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl ，再加入显色剂 B 50μl ，轻轻震荡混匀，37 ℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先将样本稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数（ ×5 ×n ）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂 B 请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

线形范围：

20ng/L -700ng/L

规格：

96 人份 / 盒

保存条件及有效期

1 ．试剂盒保存： ； 2-8℃。

2 ．有效期： 6 个月

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