抗人球蛋白试验Coomb`s
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1.原理:温抗体溶血的自身抗体为IgG在AIHA的患者中,此抗体能与表面附有相应抗原的红细胞结合,使红细胞致敏而不发生凝集,待加入抗人球蛋白血清(AHGS)后,则与红细胞上粘附的IgG相结合,使红细胞串并在一起而发生凝集,此即为直接抗人球蛋白试(DAT)。
患者血清中存在游离的自身抗体,则可用Rn(D)阳性的O型红细胞加以吸附,再用已吸附有自身抗体的红细胞与AHGS作用而发生凝集反应,此即为间接抗人球蛋白试(IAT)。
2.试剂:抗人球蛋白(IgG;IgM;IgA;C3,IgG1;IgG2;IgG3;IgG4美国产)。
3.操作:
3.1在80×60平板玻片,用油漆均分成12个小格。
3.2将各种抗人球和C3分别作倍比稀释(2;4;8-----)后;依次吸取10u于格内,做好标记。
3.3每孔加入洗涤后5%被RBC悬液10u。
3.4混匀放密闭保湿盒内,37度保温30分钟;(每隔10秒混匀一次)于镜下作效价和分值测定。
4结果:
(+-):2分反应液中有3-5个小凝块(4个RBC以上紧密聚集)。
(+):4分反应液中有6-10个小凝块游离RBC约3/4。
(++):6分反应液中有11-30个中等大小凝块游离RBC约1/2。
(+++):8分反应液中有充满凝块游离RBC约1/4。
(++++):10分反应液RBC呈结实而大的凝块游离RBC极少。
5正常参考值:阴性。
6注意事项:
6.1患者血标本必须新鲜,血球洗涤要干净不有血浆蛋白,一般生理盐水理为血清量的4000倍以上。
6.2每次试应作阴阳对照。
6.3对研究温抗体型AIHA而言,应选择单抗特异类(抗IgG、IgC、3、C3等)的AHGS,不仅诊断所需,且可将温型抗体AIHA进一步分型。
6.4血液用EDTA抗凝为佳且应立即试,以防标本放置过程中有非特异性的补体结合,致出现假阳性。
7 临床意义:
7.1温抗体型导致的AIHA,DAT,强阳性,IAT多为阴性,但亦可阳性。
7.2药物诱发的IHA,根据类型不同:多巴类DAT与IAT均为阳性;青霉素类DAT阳性,IAT阴性;奎宁类因其抗体多为IgM型,DAT多为阴性;如改用抗人全血球蛋白则DAT可为阳性。
7.3冷凝集素综合征:用抗人全血清的抗人球与37度洗涤过的患者红细胞用试,DAT亦可阳性,如用单抗IgG或IgM的特异抗血清用试,DAT则为阴性。37度作IAT结果阴性,温度下降则IAT阳性。
7.4PNH:患者在溶血发作时,DAT强阳性,发作后转阴性;IAT常为阴性。
7.5新生儿同种免溶贫:本病是孕妇的血型抗体通过胎盘进入胎作的血液,对胎儿红细胞的抗原起破坏作用而致的溶血病。故母亲与胎儿的Rh血型、ABO型或其它血型不合时均可发生。
因Rh抗体引起溶血的病例,全抗或单抗IgG或IgM呈阳性,且持续数周,经换血与输后阴性转。因ABO血型不合引起溶血的病例,DAT多为阴性或弱阳性。