去壁低渗法制作植物染色体玻片标本

一、实验目的

学习去壁低渗火焰干燥法进行植物有丝分裂染色体制片的基本原理和方法。

二、实验原理

在各种生长旺盛的植物组织中，如茎尖、根尖、幼叶基部、幼嫩的愈伤组织都进行着细胞的有丝分裂，采取前处理、固定、酶解去壁、后低渗、涂片、火焰干燥、染色等方法，就可以观察到分散良好的中期分裂相。

三、实验材料

洋葱鳞茎或蚕豆种子

四、器具及药品

恒温培养箱，显微镜，解剖器，白瓷盘，酒精灯，载玻片，秋水仙素，甲醇，冰醋酸，乙醇，纤维素酶，果胶酶，磷酸缓冲液，改良石炭酸品红或吉姆萨。

五、实验步骤

㈠取材

或将蚕豆种子洗净，加入50℃的温水浸泡一天，然后转入垫有湿润吸水纸的白瓷盘中，置25℃温箱中发芽，种子幼根长至1-2cm时，上午9时取根尖。

㈡预处理

将取下的根尖置于0.01％-0.1％的秋水仙素溶液的青霉素瓶中，浸泡处理2－5小时。

㈢固定

经过预处理的根尖，用水洗净，投入甲醇—冰醋酸（３：１）固定液固定2－２４h。其间更换一次固定液。

㈣酶解去壁

从固定液中取出洋葱或蚕豆根尖，用 蒸馏 水漂洗干净，切掉多余部分，留下分生区，放入2.5％果胶酶和2.5％的纤维素酶混合液中于27℃温箱处理2-5小时，直至材料软化。

㈤后低渗

酶液倒在另一瓶中，材料用 蒸馏 水漂洗干净，洗5次，最后一次在蒸馏水中浸泡30分钟。

㈥再固定

倒去蒸馏水，加入甲醇—冰醋酸（３：１）固定液固定10分钟。

㈦涂片

取根尖置干净载玻片上，加1-2滴新配固定液，迅速用镊子夹碎根尖，并敲打成匀浆状，这一过程固定液不能干，要干时继续加固定液，然后在酒精火焰上灼烧，呈现雨点状斑点即可贴上标签。

㈧染色

将玻片倒扣在垫有枕木的白瓷板上，将磷酸 缓冲液 (PH6.8)与Giemsa原液按20：1混合，从玻片的下面滴在白瓷板上，染色30分，再用蒸馏水冲洗玻片的背面，晾干。

㈨镜检

在显微镜下仔细观察，寻找染色体形态清析、染色适中、分散良好的分裂中期相。