如何使用AvestinEmulsiflexC3型匀浆机破碎细胞

一、设备

1. AvestinEmulsiflexC3匀浆机（Avestin）

1. 打开均质机开关（在机器后面）。

2. 打开氮气开关，压力调到读数为80 psi。

3. 扭松漏斗盖。检查漏斗帽是否工作，以确保不乙醇蒸发。

4. 转动关闭红色制动旋钮，推动绿色旋钮启动。

5. 抽出管中的残留乙醇。

6. 漏斗中倒入去离子水将乙醇洗出来。偶尔保持氮气气流，以确保没有上一组样品的细胞碎片残留。

7. 上样前，关闭漏斗置冰里遇冷。之后安装漏斗，将钢圈热交换器放置冰内保持样品冷却。

8. 将样品放入漏斗，打开匀浆仪。气压打开之前，保持样品可以通过管道回到漏斗。

9. 打开空气压力，将压力调节为40 psi，表压在20 000到25 000磅。最大压力为30 000磅。将管接入在冰上预冷的样品采集管。

10. S.Pombe酵母样品需要反复匀浆5~6次，可达到80~90%的破碎效率。酿酒酵母样品需要通过8~9次达到80~90%破碎效率。之后在显微镜下检查样本。

11. 如果均质机被样品堵塞，盖上漏斗，可用氮气气流排除。

12. 样品匀浆完成后，取下漏斗，用去离子水冲洗。

13. 用更多的水冲洗掉细胞碎片。偶尔保持氮气压力。

14.用乙醇冲洗，在漏斗中保留1/3体积乙醇。