影响双向电泳分离效果的若干实验条件比较研究

摘要：

对第一向为载体两性电解质pH梯度等电聚焦双向电泳（ISO-DALT）中若干影响分离效果的实验条件进行了研究。

结果发现，琼脂糖和尿素的纯度明显影响分离效果；加丙烯酰胺或碘乙酰胺保护经二硫苏糖醇还原的样品中的巯基，可以显著减少假斑点；厚度较薄的分离胶的分离效果较好；以琼脂糖为两性电解质载体代替聚丙烯酰胺的第一向等电聚焦电泳使分子量105Da以上蛋白质得以分离。

双向电泳方法按第一向等电聚焦的不同，可以分为载体两性电解质pH梯度双向电泳和固相pH梯度双向电泳。目前，载体两性电解质pH梯度双向电泳方法由于蛋白溶解性低、重现性低、蛋白上样量低，使其应用受到限制。

但固相pH梯度双向电泳方法存在着固相胶条昂贵，固相pH梯度灌胶技术复杂，并且只能用聚丙烯酰胺做载体，不能分离分子量大于105Da的蛋白质等问题。因此，第一向为载体两性电解质pH梯度等电聚焦（ISO-DALT）的双向电泳方法仍有其存在的合理性和改进的必要性。

对蛋白质双向电泳双胺染色法的研究发现，含有Na2S2O3非双胺染液染色后胶表面背景深，呈褐黄色，影响蛋白质点检测，特别影响低表达蛋白质点检测。不含Na2S2O3 双胺染液染色胶表面无任何背景，蛋白质点异常清晰。

但该研究并未对试剂纯度（如琼脂糖和尿素）、分离胶的厚度、样品经还原处理后巯基的保护和两性电解质载体等影响因素进行进一步的分析。为此，作者比较分析了影响其电泳效果的若干因素，找出提高该方法分离效果和范围的途径，从而提高该方法的可用性。