R&D Systems 蛋白芯片技术专辑

当您在研究用药物、细胞因子、抑制剂、病毒等作用细胞后细胞因子、信号通路（磷酸化）分子、免疫受体分子、细胞凋亡分子、干细胞标记分子、血管生成标记分子、肥胖症标记分子相关等蛋白分子表达变化的高通量初步筛选与定量检测时，面对大规模的WB实验，您是否烦躁了呢？面对表达量很低的蛋白，转膜造成的蛋白的丢失，您是否困惑啦？有一种方法可以解决上面的问题。它不需要特殊仪器，6小时最多能检测59种蛋白分子。它比WB的灵敏度高100倍左右；是WB方法和Elisa方法的融合，更有创新，比这两种方法更简单。它就是R&D Systems公司生产的蛋白芯片。

一、R&D Systems蛋白芯片特点简介

作为一种快速、灵敏而又经济的工具，蛋白芯片能同时检测单个样品中多种分析物的相对水平。蛋白芯片的使用不需要任何特殊的仪器，也取代了多次免疫沉淀/ Western blot实验。经多项研究证实，蛋白芯片能简化鉴定蛋白所需的筛选过程。通过监控蛋白水平和一些蛋白翻译后修饰的变化，能迅速靶定目标分子，以便进一步的研究。
R&D Systems蛋白芯片可以测量单一样本中多种蛋白，是一种快捷、敏感、且经济实惠的检测方法。蛋白芯片试剂盒里有缓冲液、检测抗体、和带有捕获抗体的膜，这些捕获抗体经过精心选择，有高度特异性，它们在硝酸纤维素膜上重复点样两次。经多项研究证实，蛋白芯片能简化鉴定蛋白所需的筛选过程。通过监控蛋白水平和一些蛋白翻译后修饰的变化，能迅速靶定目标分子，以便进一步的研究。

二、R&D Systems蛋白芯片及其原理试验操作步骤简单介绍

以“检测人的特定位点42种受体酪氨酸激酶（RTKs）的相对磷酸化水平”的Proteome Profiler Phospho-RTK Antibody Array（货号：ARY001）为例，介绍其原理和操作步骤。其实就相当于多个Western blot集中在一张膜上。高度特异的捕获抗体点样在NC膜上（STEP 1）。捕获抗体识别磷酸化和非磷酸化受体酪氨酸激酶（RTK）的胞外结构域，随后HRP结合的anti-Phospho-Tyrosine抗体特异检测磷酸化的RTK（STEP 2）。之后，利用化学发光检测试剂来检测蛋白，产生的信号与结合的分析物呈正比。

 

三、R&D Systems公司蛋白芯片产品特点介绍

1、R&D Systems公司蛋白芯片应用领域、类别与产品信息介绍
R&D Systems的蛋白芯片能广泛地应用与信号转导、血管再生、细胞凋亡、肿瘤、肥胖症、干细胞、药物筛选等的研究。
R&D Systems蛋白芯片目前主要有：针对人、小鼠（大鼠）的细胞因子高通量检测蛋白芯片，信号通路高通量检测蛋白芯片，免疫受体高通量检测蛋白芯片，细胞凋亡高通量检测蛋白芯片，干细胞高通量检测蛋白芯片，血管生成高通量检测蛋白芯片，肥胖症高通量检测蛋白芯片等。具体如下：

2、R&D Systems公司蛋白芯片产品详细介绍
蛋白芯片组成和结构介绍：
A、蛋白芯片组成
•    4 张芯片（也有个别芯片是8张的）。4张芯片完全一样，每张芯片上每个被检测的指标都有复孔做对照。也包括的阳性对照、阴性对照组。
•    芯片缓冲液
•    洗液 - 25X
•    生物素 或 HRP-偶联检测抗体
•    4-巢小盒
•    透明模板Transparency Overlay Template
•    产品说明书
 

B、蛋白芯片的结构

C、检测样本类别
细胞上清液，细胞溶解产物，血清，血浆等。

D、保存条件与稳定性
4°运输与保存，避免反复冻融。蛋白芯片和蛋白芯片内相关的Buffers保存时间都在一年以上，稳定性，不会有变化。

E、质检情况(QC)
•    自然样品或重组蛋白经过严格的QC质检、准确度非常高。比如ERK-2的重组蛋白放上去,ERK-3不会出结果。
•    试剂盒和支持的试剂批号配套，批次间稳定，同一个蛋白芯片的试剂（包括Buffer）可以通用。
•    核实图谱（Spot pattern and intensity） 。用自然样品如什么癌症的去处理，结果和发表的结果一致。

F、利用蛋白芯片做相关研究还需要的其他试剂（R&D Systems不提供的）

四、R&D Systems公司蛋白芯片试验操作步骤介绍
1、试验操作步骤流程图

2、以Human Phospho-Kinase Array（ARY003）蛋白芯片为例详细说明 操作步骤
A、详细试验操作步骤：

B、试验结果

C注意事项：
Human Phospho-Kinase Array（ARY003 ）蛋白芯片为何芯片为2个部分?
原因：
a、以优化敏感度，降低交叉反应，故将芯片和检测抗体混合液分成A和B。
b、磷酸化位点特异性抗体，大多来自rabbits. 其中一些抗体既是捕获抗体，也是检测抗体。两者混合可能会影响实验背景。
附Human Phospho-RTK Array（cat#ARY001）试验结果分析图：
①灵敏度（Sensitivity）。

②表达分型（Profiling ）。

③特异性（Specificity）。

五、R&D Systems 蛋白芯片优势
•    快速，灵敏，经济；
•    试剂高质高量高活性，研发和生产均使用优质试剂；
•    高通量筛选，可以筛选大量抗体、细胞因子、关键靶向分子；
•    高特性，去除交叉反应（cross-reacting）抗体；
•    灵敏度，增强信号放大作用；
•    芯片上的捕获抗体经过多次QC质选与抗体配对，性能最好；
•    简单的实验步骤，详细明了的说明书；
•    无需特殊仪器；
•    真实可靠的实验数据，充足的SCI文献支持；
•    多种试剂支持后续研究……抗体、Elisa、多因子高通量检测试剂盒等。

六、R&D Systems公司蛋白芯片产品后续产品简单介绍
在用蛋白芯片进行筛选之后，您还可以用R&D Systems可靠的Quantikine ELISA试剂盒来量化您的结果，而更多的抗体将为深入研究提供更丰富的资源（探索蛋白的奥秘，R&D Systems伴您每一步！)。

七、R&D Systems蛋白芯片文献库：

1、使用R&D Systems Human Phospho-Kinase Array（ARY003）蛋白芯片 Science文献。
A、《科学》焦点文章：癌症治疗新发现－使用R&D蛋白芯片的SCIENCE文章 ：Stommel, J.A. et al. Coactivation of Receptor Tyrosine Kinases Affects the Response of Tumor Cells to Targeted Therapies (2007) Science 318:287.
B、原文检索：Published Online September 13, 2007 Science DOI: 10.1126/science.1142946 （Coactivation of Receptor Tyrosine Kinases Affects the Response of Tumor Cells to Targeted Therapies ）
C、生物通报道：http://www.ebiotrade.com/newsf/2007-9/2007914174526.htm

2、R&D SYSTEMS蛋白芯片其他SCI刊物文献库：
ARY001

ARY002

ARY003

ARY004
… inhibitory receptor LILRB1 modulates the differentiation and regulatory potential of human …
The inhibitory receptor LILRB1 modulates the differentiation and regulatory potential of human dendritic cells
NT Young, ECP Waller, R Patel, A Roghanian, … - Blood, 2008 - bloodjournal.hematologylibrary.org
... enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits (R&D Systems ... incubated with the R&D
Systems Human Phospho-Immunoreceptor Antibody Array, washed, and ...

ARY005

ARY006

ARY007

八、R&D Systems蛋白芯片检测蛋白指标清单：