人γ干扰素ELISA试剂盒实验原理及操作方法(新手适用)
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人γ干扰素ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的人γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ),再与HRP标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人γ干扰素(IFN-γ)浓度。
操作方法
1. 标准品的稀释:人γ干扰素ELISA试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
400 ng/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
200 ng/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
100 ng/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
50 ng/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
25 ng/L | 1号标准品 |
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
检测范围:
10 ng/L -400 ng/L
人γ干扰素ELISA试剂盒仅用于测定人血清、血浆及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)含量(Attention:For laboratory use only,Not for drug or other uses)。
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