科学家发明RNA干扰实验新方法

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在最新的《自然—方法学》（Nature Methods）杂志上，谢晓亮研究组再次发表文章，提出了利用其研究组自身研发的技术——受激拉曼散射（stimulated Raman scattering，SRS）显微技术进行RNA干扰实验的新方法。

这种新方法利用无需荧光标记的受激拉曼散射显微仪进行定量成像，克服了生化分析方法繁琐的色谱分析等问题，以及CARS显微方法背景信号高，结果不精确等问题，是一种简单精确，适用于高通量分析的新技术。在这篇文章中，研究人员就利用这种方法筛选发现了8个在脂肪储存调控方面的新调控因子。

肥胖是现代社会的一大病症，会引起各种慢性疾病，比如II型糖尿病，心血管疾病等等。为了更好的了解肥胖，及其相关的代谢失序问题，我们需要深入分析脂肪在细胞水平和组织水平堆积的调控机制，目前已经进行了一些模式生物的脂肪储存调控因子的全基因组分析，但是这些还远远不够。

一般线虫脂肪储存调控因子分析方法主要包括传统的生物化学分析方法，比如进行线虫的固定染色，荧光成像等，近期一些研究组报道了利用CARS显微技术来分析。但是这两种方法都存在一些局限性，生化分析方法需要从线虫中提取脂肪，进行繁琐的色谱分析工作，这在基因组水平上是不可能完成，而且使用到的一些有机溶剂也会干扰实验分析。而利用CARS显微技术进行分析又存在背景信号高，灵敏度受限等问题。

这篇文章应用的SRS显微技术能通过对激光迅速反应，精确调制来去除背景噪音，从而不仅能够得到与传统拉曼光谱一样的谱图，而且信号强度高了几个数量级。利用这种方法和RNAi筛选相结合，研究人员就能在生理条件下寻找脂肪储存调控基因了。经过实验分析，研究人员从272个基因中找到了9个关键调控因子。

将SRS显微技术与RNAi技术结合起来，能帮助研究人员在线虫的活性生理条件下观察脂肪代谢调控，而且这种方法无需标记，极大的简化了样品准备过程，适用于模式生物的细胞追踪，也有利于高通量筛选分析。

相关方法：受激拉曼散射显微技术

完成人：谢晓亮课题组

实验室：美国贝勒医学院分子与人类遗传学系、赫芬顿老年研究中心 美国麻省总医院分子生物学系 美国哈佛大学医学院遗传学系、化学与化学生物学系、物理系 美国哥伦比亚大学化学系

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查看原文：RNAi screening for fat regulatory genes with SRS microscopy