冰冻切片实验技巧（三） 学会看片子

上接技巧（二）怎么切组织块，本期我们来看怎么看片子

这里指的是片子滑过刀片时就要辨别出质量的好坏，如果到镜下才发现片子的缺陷那就无法挽救。

1. 观察片子的厚薄

尽管冰冻切片机可以设置厚度，但人为辨别片子的厚度是否合适仍然很重要。片子太薄看起来象半透明的镜纸，片子太厚看起来混浊、柔性差，对我来说，5-6um的片子较合适，象一张薄的打印纸。

2. 片子破裂

这种假象往往是组织块冷冻过度所致，可以通过升温来解决，含水量多的组织切片很容易破裂，必须升高到一个合适的温度使裂开程度降到最小。水肿或血液组织经常有这种问题，活检的脑组织也很明显。下面的片子来源于肾肿瘤，含水量丰富，破裂也比较明显，我觉得水性的肿瘤组织在常规温度下冷冻将会变得异常的坚硬。

我觉得组织破裂的过程同一块湿布结冰一样的道理，当你用刀去挑这块湿布时它会自然弯曲，当湿布已经结冰时刀会将冰片弄裂。下面有6张片子，上面的3张破裂很明显，底部的3张很轻微，你必须仔细看才能发现，如果在切片时你集中注意力，你能感觉到甚至听到碎裂的声音。

3.片子上的条纹

垂直于刀片的细条纹为刀片缺口所致，这往往是切到钙化组织、针头或缝线的结果。

宽条纹，组织破碎或突然无法解释的切片困难往往意味着组织粘在刀片下面了，这在脂肪组织比较常见，这时刀片需要取下来清洗干净，注意清洗刀片时不要伤到自己。

4.波浪线样的横皱

这是切片机零件松动的征象，可能需要修理，切片时刀片有移动或支撑刀片的机子有移动时，往往有这种规则的条纹出现。为了获得干净整齐的片子，所有固定刀片、刀架、支撑台、支撑栓子及切片机的旋钮、螺钉、轴承都必须上紧，并且不带有垃圾残骸，支撑台或刀片下面有一点包埋物都会影响切片的质量。