植物蛋白芯片的构建和抗原抗体相互作用的研究
丁香园
2321
1. 前言
蛋白质芯片包含几百甚至几千个已知的蛋白样品，这些蛋白样品有序、高密度排列在镀膜玻璃板上。利用这些蛋白质芯片可以对蛋白质的表达 [5~7] 和修饰 [ 8~ 11] 进行平行、快速和简易的分析，同时也可以用来检测这些蛋白质与抗体、其他蛋白 [ 16，17] 、DNA [ 18，19 ] 或其他小分子 [ 20，21 ] 之间的相互作用。已有一些研究工作使用蛋白质抗原芯片分析特异性抗体 [ 12，15 ] 或从患有不同疾病的病人中筛选血清 [ 15，22，23 ] 。蛋白质组芯片作为 一种理想的分析特异性抗体的格式被人们所重视 [13] 。为了在单个蛋白质芯片上分析几 种不同的抗体，可能需要运用不同的方法 [ 24，25 ] 。与 Western 印迹相比，运用蛋白质芯片分析抗体有一些优点 [13]，其中包括高灵敏度的蛋白质检测 [13，23] 。
蛋白质组学方法，如 2D 电泳/质谱（2-DE/MS ) 方法或是蛋白质芯片技术，在植物学领域中的应用越来越多 [ 26~32 ]。在此，我们介绍一种构建植物蛋白质芯片以及利用蛋白质芯片研究抗原抗体相互作用的方法。我们已成功地运用此方法构建了包含 96 个拟南芥蛋白质的第一个植物蛋白质芯片，当每个点的蛋白质最少含有 2~4 fmol 时，用 FAST 点样片基上的抗 RGS-His6 抗体就能检测出这些蛋白质 [14] 。利用这些蛋白质芯片，我们能显示单克隆抗 TCP 抗体、多克隆抗 MYB6 和抗 DOF11 的血清识别芯片上相对应的抗原，并且不和其他包括 DOF 和 MYB 转录因子在内的固定蛋白交叉反应。
本方法中，我们使用已鉴定的 cDNA 表达克隆，高通量表达和纯化带有 RGS-His6 标签的植物蛋白质，纯化得到的蛋白质自动排列在 FAST 点样片基上。这些蛋白质芯片与相应的的抗体一起孵育，然后再与带有荧光标记的第二抗体一起孵育。我们可通过检测、分析信号，鉴定那些与被测抗体互作的蛋白质。
蛋白质芯片包含几百甚至几千个已知的蛋白样品，这些蛋白样品有序、高密度排列在镀膜玻璃板上。利用这些蛋白质芯片可以对蛋白质的表达 [5~7] 和修饰 [ 8~ 11] 进行平行、快速和简易的分析，同时也可以用来检测这些蛋白质与抗体、其他蛋白 [ 16，17] 、DNA [ 18，19 ] 或其他小分子 [ 20，21 ] 之间的相互作用。已有一些研究工作使用蛋白质抗原芯片分析特异性抗体 [ 12，15 ] 或从患有不同疾病的病人中筛选血清 [ 15，22，23 ] 。蛋白质组芯片作为 一种理想的分析特异性抗体的格式被人们所重视 [13] 。为了在单个蛋白质芯片上分析几 种不同的抗体，可能需要运用不同的方法 [ 24，25 ] 。与 Western 印迹相比，运用蛋白质芯片分析抗体有一些优点 [13]，其中包括高灵敏度的蛋白质检测 [13，23] 。
蛋白质组学方法，如 2D 电泳/质谱（2-DE/MS ) 方法或是蛋白质芯片技术，在植物学领域中的应用越来越多 [ 26~32 ]。在此，我们介绍一种构建植物蛋白质芯片以及利用蛋白质芯片研究抗原抗体相互作用的方法。我们已成功地运用此方法构建了包含 96 个拟南芥蛋白质的第一个植物蛋白质芯片，当每个点的蛋白质最少含有 2~4 fmol 时，用 FAST 点样片基上的抗 RGS-His6 抗体就能检测出这些蛋白质 [14] 。利用这些蛋白质芯片，我们能显示单克隆抗 TCP 抗体、多克隆抗 MYB6 和抗 DOF11 的血清识别芯片上相对应的抗原，并且不和其他包括 DOF 和 MYB 转录因子在内的固定蛋白交叉反应。
本方法中，我们使用已鉴定的 cDNA 表达克隆，高通量表达和纯化带有 RGS-His6 标签的植物蛋白质，纯化得到的蛋白质自动排列在 FAST 点样片基上。这些蛋白质芯片与相应的的抗体一起孵育，然后再与带有荧光标记的第二抗体一起孵育。我们可通过检测、分析信号，鉴定那些与被测抗体互作的蛋白质。
