三氯乙酸-丙酮法提取植物全蛋白
丁香园
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1. 前言
在蛋白质组研究中，双向电泳图谱的比较占有重要地位。双向电泳必须能很好地分离各个蛋白质，应尽量避免拖尾、横纹或因蛋白质降解而产生的假相。蛋白质在图谱上的分布模式必须是可重复的。蛋白质样品的制备是这些条件得以保持的重要前提。植物蛋白提取的难点在于植物细胞中蛋白质的含量低，同时还含有很多干扰蛋白提取的有机物 ，如酚类、色素、脂类及核酸等 [1] 。提取出的蛋白必须溶解在与等电聚焦 （IEF ) 电泳缓冲系统兼容的样品溶液中。
经过在各种植物组织中的试验，我们建立了一种以三氯乙酸和丙酮使蛋白质变性并沉淀的提取方法。本方法起源于 Wu 和 Wang [ 2] 最初关于三氯乙酸沉淀蛋白质能高效抑制蛋白酶活性的报道。提取出来的蛋白质最后溶解在尿素-碳酸钾-SDS (UKS )[ 3] 溶液中。用本方法提取的蛋白质样品在电泳中具有很好的重复性，同时对于高分子质量和髙等电点的蛋白质也有很好的分辨率，因而被广泛使用，且命名为三氯乙酸/丙酮法[ 4, 5 ] 。
UKS 样品缓冲液适合用于最初的自制管胶进行的等电聚焦电泳。这种自制管胶进行等电聚焦时，pH 梯度是在施加电压后由两性电解质移动形成。20 世纪 90 年代开始出现的商品化的 IPG 胶条用于等电聚焦电泳，大大提高了电泳的重复性，因而被广泛使用。
然而，使 用 IPG 胶条进行等电聚焦时，需要施加很高的电压，而 UKS 溶液中的高含盐量和 SDS 使得该缓冲液不适合这种等电聚焦系统 [6]，因而必须采用新的样品缓冲液。
本章，我们将着重描述分别为进行传统的等电聚焦和现代的 IPG 等电聚焦电泳制备样品所采用的不同步骤。
在蛋白质组研究中，双向电泳图谱的比较占有重要地位。双向电泳必须能很好地分离各个蛋白质，应尽量避免拖尾、横纹或因蛋白质降解而产生的假相。蛋白质在图谱上的分布模式必须是可重复的。蛋白质样品的制备是这些条件得以保持的重要前提。植物蛋白提取的难点在于植物细胞中蛋白质的含量低，同时还含有很多干扰蛋白提取的有机物 ，如酚类、色素、脂类及核酸等 [1] 。提取出的蛋白必须溶解在与等电聚焦 （IEF ) 电泳缓冲系统兼容的样品溶液中。
经过在各种植物组织中的试验，我们建立了一种以三氯乙酸和丙酮使蛋白质变性并沉淀的提取方法。本方法起源于 Wu 和 Wang [ 2] 最初关于三氯乙酸沉淀蛋白质能高效抑制蛋白酶活性的报道。提取出来的蛋白质最后溶解在尿素-碳酸钾-SDS (UKS )[ 3] 溶液中。用本方法提取的蛋白质样品在电泳中具有很好的重复性，同时对于高分子质量和髙等电点的蛋白质也有很好的分辨率，因而被广泛使用，且命名为三氯乙酸/丙酮法[ 4, 5 ] 。
UKS 样品缓冲液适合用于最初的自制管胶进行的等电聚焦电泳。这种自制管胶进行等电聚焦时，pH 梯度是在施加电压后由两性电解质移动形成。20 世纪 90 年代开始出现的商品化的 IPG 胶条用于等电聚焦电泳，大大提高了电泳的重复性，因而被广泛使用。
然而，使 用 IPG 胶条进行等电聚焦时，需要施加很高的电压，而 UKS 溶液中的高含盐量和 SDS 使得该缓冲液不适合这种等电聚焦系统 [6]，因而必须采用新的样品缓冲液。
本章，我们将着重描述分别为进行传统的等电聚焦和现代的 IPG 等电聚焦电泳制备样品所采用的不同步骤。
