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镍柱的清洗和保养

Cytiva(思拓凡)

30217
今天为大家带来镍柱的保养和清洗建议。

Ni柱的使用与保养

1. 对于一般的预装柱(Crude系列除外),上样前,样品需要使用0.22μm/0.45μm滤膜进行过滤或者离心处理,以避免样品中有细胞碎片等固体物质,堵塞柱子。

2. 如果细胞裂解后非常粘稠,需考虑是否因为DNA、RNA这类核酸物质过多,需要加入核酸酶去除,以降低样品粘稠度,提高上样速度及洗脱效果。

3. 柱子使用过程中,不能超过填料的压力,以免填料被压塌。

4. 每次使用后,可使用5-10倍柱体积的纯水或者结合缓冲溶液对柱子进行清洗。(如果出现载量严重下降或者压力增加,需考虑彻底清洗)

CIP(彻底清洗)

常规柱子(除了Ni excel)如出现反压严重升高或者柱子明显颜色改变,说明柱子需要进行彻底的清洗。

1. 脱镍:
(1) 脱镍缓冲液:20mM 磷酸缓冲液,0.5M NaCl,50mM EDTA,pH 7.4。
(2) 使用5-10个柱体积的脱镍缓冲液冲洗柱子,
(3) 然后再用5-10个柱体积的水冲洗柱子。

2. 去除沉淀蛋白、疏水性蛋白及脂蛋白:将柱子置换到1M NaOH中,室温1-2小时(若需要去除内毒素可延长至12小时),再用5-10个体积去离子水冲洗。

3. 去除强离子吸附蛋白:使用1.5M NaCl洗柱子,约10-15分钟,然后用大约10个体积去离子水冲洗。

4. 挂镍:加入0.5ml(1ml柱子)或者2.5ml(5ml柱子)0.1M的NiSO4,使用5个柱体积的去离子水冲洗,再用缓冲液冲洗5个柱体积,最后置换到20%乙醇中保存。

Ni excel系列

可以定期使用NaOH进行彻底的在位清洗。使用NaOH能够比较彻底地清除各类蛋白的杂质,便于延长柱子的使用寿命。使用不同样本中间,加入洗涤步骤,可以避免互相之间的交叉污染。具体清洗步骤如下:

1. 针对强离子结合的蛋白,用1.5M NaCl 清洗多个柱体积,再用用约10个柱体积的去离子水或者平衡缓冲液清洗。

2. 针对沉淀蛋白、疏水性蛋白、脂蛋白,用1M NaOH保存柱子1-2小时(如果需要去内毒素,可以延长至12-24小时),再用约10个体积的去离子水或者平衡缓冲液冲洗。

3. 针对强疏水性蛋白、脂蛋白、脂类,使用5-10个柱体积的30%异丙醇冲洗约15-20分钟,再用10个柱体积的去离子水或者平衡缓冲液冲洗。

 
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