简单高效的植物总RNA提取利器!
杭州新景生物试剂开发有限公司
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实测植物总RNA提取液套装提取土豆、桑叶中的RNA
一直以来,搞植物研究的同学们对Trizol试剂提取植物RNA诟病不断,在这样的背景和需求下,我们特别研发了植物总RNA提取液套装,套装中除了植物总RNA提取液外,还包括了Buffer EX(氯仿替代品),RNA沉淀液(异丙醇替代品)以及β-巯基乙醇。真可谓一个套装在手,提取植物RNA无烦恼!现在我们特别选择了土豆块茎(Trizol试剂提取失败)和桑叶(Trizol试剂提取效率极低)两个典型样本实测植物总RNA提取液套装的效果。
实验目的:
用植物总RNA提取液套装从桑叶和土豆块茎中提取RNA。
实验材料:
桑树叶片、土豆块茎,研钵,植物总RNA提取液套装(Simgen Cat. No.5123100)
超微量电子天平(DENVER INSTRUMENT,TP-213)
旋涡震荡器(越新仪器,XH-C)
台式离心机(eppendorf Centrifuge 5415 D)
超微量分光光度计(Simgen Cat.No.sim100)
电泳仪(北京六一仪器厂,DYY-6C型 )
土豆内参引物(F:ATTGGAAACGGATATGCTCCA/R:TCCTTACCTGAACGCCTGTCA)
2×One Step SYBR Green RT-qPCR Mix(Simgen Cat. No.7405500)
荧光定量PCR仪(ABI7500)
实验内容:
实验结果:
1、2是土豆使用植物总RNA提取液套装所获得的总RNA;3、4是桑叶使用植物总RNA提取液套装所获得的总RNA。
1、2条带是土豆RNA电泳结果;3、4条带是桑叶RNA电泳结果,M是DL2000 Marker。
实验讨论与分析:
综上所述,植物总RNA提取液套装是与Trizol试剂完全不同的产品,不仅不涉及酚氯仿的使用,而且非常适合从高多糖多酚的植物样本中提取RNA。除此之外,植物总RNA提取液套装不仅操作步骤比Trizol试剂更为简单方便,同时又与Trizol试剂一样,对样本的用量没有限制,非常适合一次需要提取非常大量RNA的用户使用。
Simgen实验室
2020.08.28
一直以来,搞植物研究的同学们对Trizol试剂提取植物RNA诟病不断,在这样的背景和需求下,我们特别研发了植物总RNA提取液套装,套装中除了植物总RNA提取液外,还包括了Buffer EX(氯仿替代品),RNA沉淀液(异丙醇替代品)以及β-巯基乙醇。真可谓一个套装在手,提取植物RNA无烦恼!现在我们特别选择了土豆块茎(Trizol试剂提取失败)和桑叶(Trizol试剂提取效率极低)两个典型样本实测植物总RNA提取液套装的效果。
实验目的:
用植物总RNA提取液套装从桑叶和土豆块茎中提取RNA。
实验材料:
桑树叶片、土豆块茎,研钵,植物总RNA提取液套装(Simgen Cat. No.5123100)
超微量电子天平(DENVER INSTRUMENT,TP-213)
旋涡震荡器(越新仪器,XH-C)
台式离心机(eppendorf Centrifuge 5415 D)
超微量分光光度计(Simgen Cat.No.sim100)
电泳仪(北京六一仪器厂,DYY-6C型 )
土豆内参引物(F:ATTGGAAACGGATATGCTCCA/R:TCCTTACCTGAACGCCTGTCA)
2×One Step SYBR Green RT-qPCR Mix(Simgen Cat. No.7405500)
荧光定量PCR仪(ABI7500)
实验内容:
- 在研钵中加入约300 mg小块的土豆块茎或桑树叶片,加入1.8 ml已加入β-巯基乙醇的植物总RNA提取液,然后用研磨棒进行研磨,直至组织呈匀浆状。
- 吸取700 µl混合液分装到两个1.5 ml离心管中(备注:在植物总RNA提取液套装说明书中步骤1、2要求将植物样本经液氮磨成粉末状后再按每管100 mg的量分装到1.5 ml离心管中,每管再加入600 µl含β-巯基乙醇的植物总RNA提取液)。
- 加入600 µl Buffer EX,用力混合均匀,13000 rpm离心10分钟。
- 小心吸取350 µl上清,转入一个洁净的1.5 ml离心管中。
- 在上清液中加入等体积的RNA沉淀液,盖上管盖混合均匀,13000 rpm离心5分钟。
- 弃上清,低速离心数秒使管壁上的上清液聚集到管底,用200 µl吸头吸尽残留的上清液。
- 加入1 ml 70%乙醇,盖上管盖,旋涡震荡悬浮RNA沉淀,13000 rpm离心3分钟。
- 弃上清,盖上管盖,低速离心数秒使管壁上的乙醇沉降到管底,用200 µl吸头吸尽残留的乙醇,保留管底及管壁的白色RNA沉淀。室温静置5分钟干燥RNA。
- 根据RNA沉淀量加入适量RNase-free水(土豆块茎样本50 µl,桑叶样本200 µl)旋涡震荡溶解RNA,在超微量分光光度计上测量RNA的浓度,然后进行琼脂糖凝胶电泳。
- 按照2×One Step SYBR Green RT-qPCR Mix的说明书操作,对提取到的土豆RNA进行荧光PCR扩增。
实验结果:
- 在微量分光光度计上用RNase-Free Water调零,测量提取好的RNA,结果如下:
1、2是土豆使用植物总RNA提取液套装所获得的总RNA;3、4是桑叶使用植物总RNA提取液套装所获得的总RNA。
- 在1%的琼脂糖凝胶上,加入5 µl提取到的RNA,电泳20 min,结果如下:
- 土豆RNA荧光PCR曲线图
实验讨论与分析:
- 从微量分光光度计测的结果上分析,使用Simgen植物总RNA提取液套装,不论是土豆块茎还是桑叶都获取到了纯度非常高的RNA。通常Trizol试剂提取的RNA会出现的A260/A230值偏低的情况也没有出现。
- 从电泳图上分析,RNA条带完整,有不明显的基因组DNA污染(土豆RNA)或者根本就观察不到基因组DNA污染(桑叶RNA),与分光光度计测得的数据有较好的对应关系。
- 从荧光PCR结果上分析,扩增曲线正常,无抑制现象。
综上所述,植物总RNA提取液套装是与Trizol试剂完全不同的产品,不仅不涉及酚氯仿的使用,而且非常适合从高多糖多酚的植物样本中提取RNA。除此之外,植物总RNA提取液套装不仅操作步骤比Trizol试剂更为简单方便,同时又与Trizol试剂一样,对样本的用量没有限制,非常适合一次需要提取非常大量RNA的用户使用。
Simgen实验室
2020.08.28