细胞培养中霉菌污染问题

Julius：我的细胞被污染了，表现为培养液内有浑浊，可见很多白色粉末的东西悬浮，之前发现一瓶有，就丢了，剩下的及时换液，清洗，可在传代后的第二天就又见浑浊，仍有部分细胞是贴壁的，可以看到很多”细胞“首尾相连成一条条的线状，可细胞怎会是线状生长呢？（抱歉没有拍下照片）请问是霉菌还是细菌污染呢？如何区分细菌，霉菌及真菌的污染。现在如何处理呢？污染控制区大家所说的用甲醛熏蒸，碘伏擦拭，或75％酒精 擦拭，是用那种呢？时间要多长呢？

因培养箱内还有别人的细胞，现在消毒处理时剩余的细胞该怎么办呀？还应注意什么呢？

liyq_1：应该是霉菌污染.其特点正是肉眼可见白色悬浮,形态呈线状.

qxlbljys：1.细菌污染液体混浊,霉菌污染可看见霉苔但液体不混,所以你的细菌和霉菌同时污染

处理:扔掉,以免污染其他细胞

2.你说的线状生长实际上细胞已经接近死亡

3.可以将培养箱用75%的酒精擦拭,并停止细胞培养,然后用紫外消毒房间

sunandsuny：由于细菌的生长分裂呈指数级的生长方式,所以细菌污染后,培养瓶很快就是浑浊的了,但一般不像霉菌污染,霉菌有菌丝,往往呈絮状漂浮,甚至有丝状突起.因此霉菌污染和细菌污染在肉眼上有时可以大体上区分,这只是一些常规的经验,如果要具体确定,还要通过涂片染色,看看是球菌或杆菌或是弧菌．

叶知秋：原代培养的软骨细胞，贴壁良好，长势旺盛，可霉菌悄然而至，大有疯长之势。不想放弃，该如何处理，敬请指点。

ratman：配制以下5X抗生素培养液：AMP:100ug/ml, gentamycin 100ug/ml, 两性霉素B 2ug/ml, 制霉菌素1.5ug/ml, 脱氧胆酸钠 10ug/ml，进行冲击，培养时间为8小时后换液，改用1X抗生素培养液进行培养，以上配方为1x配方。每天换液。

icesugar75：别救了。霉菌是抗拒不了地，别让这瓶细胞把其它的污染了最重要。

eming43：同意楼上的 ，如果细胞不是珍贵的没有了，最好是放弃。你在救细胞上花的功夫还不如重新养，霉菌真的不好处理，况且放在培养箱里还有可能污染其他的细胞，更可怕的是换液时把培养基也污染了，那你就等着更多的麻烦吧！

dongshiwu：照着二楼的方法有效,我曾经仅用二性霉素就将霉菌污染的293细胞救回来过.

linbmm：细胞培养过程中，通常有意想不到的状况发生。昨天观察我的细胞时，发现皿中有黄色斑点形成，斑点边缘不是很清楚，培养液未发生变化，细胞形态也没受影响。其实这就是霉菌污染的早期现象。今天再观察时，斑点已扩散，而且皿中斑点数量也增多了。大家遇到过这种情况吗？怎样消除霉菌污染现象？

juju：如果发现霉菌污染，尽早把细胞扔了，如果是细胞培养板一孔或几孔污染，小心吸除后加高浓度氢氧化钠封闭。避免污染扩大，害及其他孔或培养瓶中细胞。已经发现污染再加两性霉素是没有用的。供参考。

jzyxynwm：霉菌污染不要吝惜细胞,坚决丢弃,复苏冻存细胞,还要注意要把孵箱和整个培养间做彻底消毒,用甲醛熏蒸,孵箱用苯酚彻底搽净!!对于两性霉素等药物的挽救措施建议你不要采用,因为任何一种外来药物对细胞都会产生不良,甚至未知的影响,包者对实验严谨的态度,一切从新开始!!!做细胞培养要抱着平和的心态去做,不可急功近利,这样往往事半功倍!!!!

soso_fan：一般出现霉菌污染，如果不是非常珍贵的细胞一般都是扔掉，而且连相关的容器都要做严格的处理。两性霉素B可以起到抑制霉菌的作用，一般只是培养前把标本短时间的浸泡，培养液里一般不加，因为抗真菌药物的细胞毒性还是比较大的，一旦出现了污染还是早点扔掉为好，以免污染其他细胞造成更大的损失。即使用高浓度的抗真菌药物处理过，细胞估计也不会好到哪里了。

drhl：我的细胞最近也出现了霉菌污染，不知道怎么回事。以前是偶尔有一瓶污染，现在却是大批量的污染。我初步估计实验时吸管不干净，因为那批吸管没有泡酸就高压了。

maokai123：酶菌厉害得原因是霉菌会产生孢子，孢子空气传播，比一般接触传播的细菌厉害的多，楼上同学的吸管我想不是问题，霉菌一般是人带到细胞房的，到细胞房最好换衣服换鞋。污染发生了除了常规的处理以外，一定要彻底处理污染材料，焚烧，不要留在实验室，不然容易重复污染，空气要甲醛熏蒸消毒。孢子对紫外的抗性很强。人员的个人卫生也重要，试验服洗洗晒晒吧，不留长发，常洗澡

zhizuchangle：我们是采用在水盘里加硫酸铜来预防霉菌！

wangzhua：我们几乎所有细胞均有如图片中的污染存在,开始时只有较少小黑点粘附在部分细胞上,后来几乎所有细胞身上都长满了如此的小黑点,这个周期要三两个月的时间,小黑点长得不是很快,好象开始时对细胞状态也没有太大影响,但传代时可见瓶底有很多细胞碎片似的东西,这个东西多了以后,细胞长势缓慢.心疼啊,哪位高手有好的办法?

前两在清理培养箱,发现箱体上有霉菌斑,送检以后说是毛霉菌,如何解决?

有时候消化细胞的时候可见到这些小东西从细胞的残骸里跑出来,很恐怖，但活动不是很剧烈,只在原位振动,这也是它长得慢的原因吧。

所有照片在Nikon倒置相差显微镜40倍物镜下用数码相机拍摄,放大倍数约800倍

哈佩雕：你这下就惨了，长了霉菌细胞只能扔了，而且整个实验室和培养箱都要消毒啊。我们实验室液发生过类似事件，我把我们处理过程告诉你，希望对你有帮助：

首先消毒培养箱，如果你们有两个或以上培养箱就好办了，如果只有一个且还有很多其他细胞就麻烦点。只能暂时的放在超净台上。具体如下，中午将空调温度打到最高（也只有31度），超净台开紫外。下午早点来关紫外，将细胞转到超净台内，用75％酒精擦洗培养箱，再用无臭氧型可移动的紫外等照射半小时，然后将细胞放回即可（切记CO2瓶子阀门要关紧啊，不然气全跑光了）。再消毒实验室，先把室内空调和消毒柜过滤网都拆下清洗，在锥形瓶内加点高锰酸钾，放在实验室地上，然后倒入甲醛，立马关门走人就可以了。2天后再开门装好东西，和往常一样开始工作了。由于2天不能做事，个人细胞要先计划好，大家都可以休息两天。

shaverwoo：确实应该仍了，否则挽救只会浪费你更多的时间。我也遇见过，还曾经挽救过，我用了制霉菌素来反复洗涤细胞，并在培养液里也加了，看着细胞长好了，还以为成功了，接着传了二代，还冻了些，可是之后，仍然不断的有霉菌污染发生，取出冻的细胞一复苏，根本不贴壁，一查，是真菌，所以赶紧消毒实验室还有你用的所有材料吧，一定要全部重新彻底消毒

jcl738：三天之内竟然发现有两瓶LB培养基出现了霉菌污染（一瓶加了氨苄），很郁闷，今天不得不把摇的菌倒掉了.使用时严格按照无菌操作了，但为什么还是被污染了呢？

我爱标标：霉菌污染是防不胜防的,你的培养基被污染了,只能说明一个问题:你的实验技术还不过关.再继续努力吧!

frederick：可能是周围的空气中有霉菌，你那操作台附近最近有没有搬过什么中大型的东西，或移动了什么。我们这里前几天移了一下冰箱，那个星期的平板摇瓶全染霉菌了，所以你在接种或培养的的时候千万要注意环境的变化，霉菌就是在不经意见进入了你的摇瓶或平板。

jcl738：我配的培养基不是我一个人用，我实验室人都用啊！我是新手，可能是我的问题！没有搬过什么东西，不过我们的超净台就在门口附近。实验室用紫外照可以杀霉菌么？

趙子植：LB被霉菌污染的原因有

1、制作时灭菌不完全,可以增加灭菌的时间到40分钟试试看

2、灭菌完全但是灭菌后无适当保存,可以将LB保存在4度的环境要使用时再回温并且注意瓶盖是否有完全密闭

3、操作不当,操作时未按照无菌操作原则保持无菌环境或者是操作人员双手未先以70%的酒精消毒

4、菌种受到污染,所种的菌种已经受到霉菌的污染,建议换掉菌种

5、不论是受到何种因素污染皆可以利用简单的对照组实验来找出污染的原因为何,建议可以自己试试看

freechange：我作了这么多次还没有被霉菌污染过，可能使我侥幸。但我想主要原因是因为我注意了一下操作：

1、我操作的时候，总是在灭菌同时超净台外侧窗口处，喷一些医用酒精，以控制周围附近的空气中漂浮菌。

2、在做完试验后，超净台里喷一遍医用酒精，然后严格按照紫外灭菌等操作。

3、 还有，超净台长时间使用了的话，要把里面的防尘过滤网拆下来，用吸尘器或者其他东西吸净，洗净。

wang_gost：培养箱中放一些饱和硫酸铜溶液可以防止霉菌污染细胞

Reesei我做的是霉菌，我也很担心染菌，不过我是担心把别人的培养基染上我的菌，呵呵

有霉菌的话紫外杀菌要 长一些 ，三十分钟左右；超净工作台霉菌与细菌最好分开用，如果超净工作台系统染菌的话，恐怕要进行一次彻底杀菌了；培养基ph值可以适当调高一些，霉菌一般喜欢偏酸性。

mjing：我觉得还有可能是你们实验室还有人正在做霉菌的,如果产孢子的话,紫外消毒的时间应相对长些.还有你可以加青霉素或链霉素在培养基中,效果可能会更好.

gleydream：有一个方法可以试试 紫外开的时间久一些 同时一定要有些间隔 比如 开20分钟，然后关掉10分钟 再开20分钟 记得我得老师以前说过的 因为有时候孢子可能没有完全杀死 两次这样的话 就可以了 。还有就是，尽量不要再太潮湿的空气 操作，同时不要裸手经过瓶口。最好是能直接放在无菌室。一般很少染菌吧。我得LB没有加氨卞的，放了1个月都不长菌。可能和就放在无菌室有关 ，或是超净台

neighboour：我养的VM总是出问题，原代培养后1-2天内没有什么问题，换液一次后1天毛病开始出现。

（1）加血清的VM细胞出现丝状漂浮物质，生长快速，培养液不混浊，细胞生长差。贴图1

（2）不加血清培养的VM细胞没有出现这种情况；

（3）两者均出现散在的黑色“细胞形状”的物质，（贴图2）经观察未见明显增长和数量增多。

我师姐说可能是霉菌污染，并告知我严重的后果，我不知道是不是

我的血清有问题？但是我师姐也用同一大瓶分装的血清，她没有这种情况出现。而且上次出现过一次污染之后，我抛弃了我原有的DF12和血清，重新配置和分装（2）是否为我换液过程中操作不慎？我以前在其他试验室也是如此操作，没有出现过问题的呀。（3）黑色的小颗粒物质是否和使用酒精灯过火玻璃吸管有关？我师姐的细胞有时也出现过这种情况。在以前的培养室（用液化气）内没有出现过这种情况。我不敢肯定这次的污染是否和这些物质有关。（4）如果是霉菌污染，该如何消毒呀？？

fancychen_78：你的真的是真菌污染，链状的菌珠是真菌的菌丝，你的培养液中加了双抗吗，一般双抗终浓度为：青霉素100U/ml ,链霉素100u/ml，市售的青霉素为80万U/瓶，溶于4ml体积内，每1000ml培养液中取0.5ml，链霉素为100万u/ml，溶于5ml体积内，每1000ml培养液中取0.5ml。污染严重时可以采用5-10倍的冲击剂量。已经吸取过细胞或培养液的吸管不要放在过分烧，甚至可以不少，否则，蛋白烧后，会释放有毒物质

midas：建议可以先把液体过滤一下，在悬浮细胞，如果还有问题的话，就怀疑是在操作中有问题－－这时最好先看看别人的操作！

neighboour：midas是说我把DF12过滤，还是说把培养皿内的培养液过滤，另外，如果是真菌感染的话，双抗是否没有作用呀。

midas：当然是把加了血清的DF12过滤！

生物迷：介绍点我的经验：真菌大多悬浮于液体表面,如果发现有少量真菌污染可用大量PBS或D-HANKS冲洗,加含有双抗的培养基培养观察3天,然后看有没有真菌.我用这种方法救了一瓶非常宝贵的细胞(用GIBCO胎牛血清外加FGF-2培养了一个月的MSC).

seaman_wang：如果你霉菌污染，有两种方法，一种是你制备一些小鼠的饲养细胞加入板上，一起培养，让饲养细胞中的巨噬细胞吃到霉菌。第二种，在培养基中加入制菌霉素。

PINX：是真菌污染，可以用两性酶素B试试看，不要用国产的，因为试剂不纯，有较大毒性，GIBCO有商品化的两性酶素，我师妹用过效果不错。

heimukai13：请问:我先配置DMEM,然后过滤,吸3ml检菌三天,若无菌,添加FBS和双抗,过滤后贮存备用.(不知这样对否?因为我是从别的实验室学的,我连续几次配,检菌时都发现培养基表面有一层薄薄的如雪花形状的东西,它在配完培养基第二天下午六七点还看不到,而到九十点就能看到好多,非常迅速,但往后几天却又不怎么长了,培养液一直是清澈的,很纳闷,不知是什么东西,)

若配置DMEM后不检菌,而直接加FBS和双抗,成为全培养基,过滤备用,可以吗?

asd1191：双抗要在配DMEM时就要加，然后过滤！过滤后最好在DMEM中加一点血清在培养，这样长菌的话快！过滤前是不加血清的，因为血清是很难过滤的！培养基表面的如雪花形状的东西可能是长菌的，你摇晃一下瓶子，若浑浊了，则很有可能污染了！另外培养基最好不要反复过滤！这样营养成分会丢失的！另外反复过滤的话会偏碱！

heimukai13：哦,原来要先加双抗的!加了双抗,还需要检菌吗,我想一般就生不了细菌了吧!我不加血清都有漂浮物了,会不会是真菌呢,是的话,怎么防止呢?那些雪花状的东东,摇一下,还是在表面荡来荡去,培养液清澈.(见图)我过滤加FBS后的培养液很好过滤的!怎么回事呢?

hualey：加双抗也只是防止一般染菌，但像支原体等污染就很难起作用，所以加了双抗之后还是要验菌的。感觉你那东西像染菌，因为1）你没加双抗；2）开始没有，第二天才出现（除非你的培养基pH发生大的变化，一般不可能）。鉴于你每次都出现这种情况，你是否可考虑环境或操作有问题，你也没说具体，所以只能作为建议。小牛血清不好滤是相对的，我滤过小牛血清，只是比不加血清的培养基难滤，有时含血清培养基用久了，我还用滤器滤过呢！

heimukai13：我第一次配时没有发现这种情况,后面三次操作都一样,而且用的都是刚灭过菌的东西,而出现照片上这种东西了,会不会是培养液里的氨基酸什么的析出来了呢,因为这雪花样东西过上几天还是这么多,是菌的话应该长疯了吧!而如果是支原体的话,应该肉眼看不见的了.

scp：应该不是氨基酸析出，若是氨基酸析出的话沉淀是在底部的。漂浮在上面会不会是霉菌呀？你有没有用这种培养基养过细胞呀？不妨尝试一下看看有没有污染，如果没有污染的话，大可继续使用。还有。双抗一定要在过滤之前就加上，血清最好也是这样（虽然过滤速度会慢一些）。

heimukai13：应该不是霉菌吧,霉菌是丝丝连连的,绒球球样,长起来好多就悬浮在培养液里了,有一瓶细胞曾经污染过,这个就不一样了!我试试看用它来培养细胞!

朱晶：：双抗一定在要滤之前加，对于DMEM培养基我建议在-20冻存后，如果想用最好提前一天化出来，放到4度里放一天再用，这样比较好，因为这种培养基极愿意产生一些析出物，放置一天会就会溶开了。而且我觉得血清最好还是不要过滤，里面含有一些大分子的营养成份，如果过滤的话对血清本身来说是一种损失。

szmengjie：我第一次培养T淋巴细胞，加了PHA刺激其生长。发现显微镜下它们长得特别快，昨天还是密度适中的圆圆，亮亮的小豌豆一样的游离的细胞。细胞中间有些聚集成团的颜色较深的象一堆血小板一样的东西。今天一看，已是长得平铺了一视野的密密麻麻的看不出单个细胞的形态，大小。呈向心性分布，即中间密度尤高，而越到边缘，则稀疏点。在稀疏处可看到圆圆，亮亮的小豌豆一样的游离的细胞。肉眼培养液里有白色絮状物。白色絮状物究竟是污染还是细胞数太多？

菊花与刀：是不是霉菌感染呢，我前段时间培养的细胞最后就是感染霉菌了，就是一团一团的漂在上面，中间密度高，周围稀疏，高倍镜下可以看到菌丝。

szmengjie：我想霉菌污染是有可能，我用的是24孔培养板，因为标本是断断续续地来，一次只能用其中几个，将那些细胞悬液吸走后，因还有没用过的孔，舍不得丢掉培养板。过一天，看那些曾用过的孔，孔底部长出象雪花一样的，也可说象海藻一样，每个枝象细胞生物学上分子筛的图像一样。我想问：1 细胞太多能出现白色沉淀吗？2 霉菌污染除开看到菌丝，还有其他方法证明其存在吗？早期有什么补救措施吗？3我对细胞培养时出现的污染实在没有概念。有没有哪里提供图谱，让我们这些新手认认敌人的面貌呢？

culture-spirit：1、可以，镜下可见此处细胞程大团分布

2、如果霉菌污染已经到了出现白色沉淀的时候，一般能够看到菌丝了，镜下相当明显

3、这个我也没有找到，好象一些细胞培养的书付页里有，可以请教其他战友

qjzhou2000：

1、不会是 沉淀的，仔细看应该还是可以看到细胞形态的，你用的是不是olmpus的相差境？那种倒置境的相差效果很好，细胞看起来有点象珍珠。

2、霉菌看到菌丝的时候就很厉害了，早期不容易发现，可以加两性霉素之类的抗霉菌的抗生素，具体请在该区搜索，很多都讲到了。

3、现在还没找到，不过一些描述还是很直观的。

midas：细胞数太多会出现片状的脱落，所以白色絮状物污染的可能性大些！

独上高楼：霉菌污染后细胞多生长很慢，象你这种情况，细胞一夜就长满，霉菌污染的可能性不大。另外，霉菌污染也不能一下就看出白色絮状物，而是先在镜下看到较稀少的短小黑色分枝串珠，再看到较密集的短小黑色分枝串珠，最后才能肉眼看到白色絮状物，这个过程大约要1个星期左右，而且在这期间细胞几乎不生长。

szmengjie：前段时间我老被这种在细胞培养液中白色的象一片白膜的东西困扰。40倍镜下同“细胞污染讨论区”贴出的图片一样。上周我送了个培养，结果证实是真菌污染。显微镜下（100倍油镜）染色后可见到一颗颗象红色的南瓜子一样的东西（真菌孢子）。据细菌室的老师说还可在这些“红南瓜子”间见到丝一样的东西。可能就是菌丝了。

我已经非常注意实验器材的消毒灭菌，操作应该也没问题。于是将试剂一个一个吸取了放在显微镜下观察，发现是洗细胞的HANK'S液被真菌污染了!现在我已经换了HANK'S液，这种污染可以说被控制了。

yoyo781206：我想应该是污染了，因为我也遇到过，过几天就看到放射状的菌丝了

topgun：象霉菌的菌丝，但应该观察其数量是否增多？因为霉菌污染在2-3天内可见大量的菌丝！如果是不小心带进去的棉絮则不会有数量的增加且培养基也不会变混浊。

yuandong：我想应是霉菌，白色，絮状，培养基变成了黄色。

apple800828：不象霉菌污染。前两天我培养的内皮细胞被霉菌感染了，好典型的树枝分叉样。象抽丝一般。

chenting100：是霉菌，我们的细胞就经常出现这种污染，实验室老师说霉菌有好多种变异呢。

huvec：其中有多细胞真菌污染的特征性标志：菌丝！

wujinghui：我得细胞培养液中不知道是什么东东，它漂浮生长，在瓶底是白色的，在低倍境下就能看到，在培养瓶里边呈葡萄状，还有的呈树枝状，刚开始时候生长的不快，但是很快就长得很快。不知道这个东西是什么东西，英文名字怎么写，最好能告诉以下如何控制！

ya2cyto：霉菌感染。霉菌是以孢子在空气中传播，细胞肯定是不能要的了，一旦污染很难控制

用环氧乙酸熏蒸培养箱，最后再对培养箱进行无菌实验方可使用

wujinghui：不是霉菌，因为霉菌不用显微镜就能看得到的 。我这个不用显微镜是看不到。

shyaroom：不信？你再放个三天，肯定就能用肉眼看到啦，呵呵。不过建议你换个地方放，别把其它细胞再给污染了。

ylh1976：霉菌，树枝状的东西是菌丝，葡萄状是霉菌。赶紧处理掉细胞，培养箱、操作台还有整个培养室好好消毒一下。梅雨季节要千万小心，空气中到处都有霉菌孢子。

深谷幽兰：各位，有时鸡胚成纤维细胞也连在一起，呈树枝分叉状，而正常的细胞单个散在，这是怎么回事？

junny999：我的一个同事养的细胞被霉菌污染，我与她共用一个培养箱，为防止交叉污染，我想在我的培养基里加点抗霉菌的药，请教加哪一种药物比较好？剂量怎样添加？我养的是MSC

XTYang：Invitrogen公司的Fungizone, 1%(v/v)的用量。对有些细胞有毒害作用。

renjiaqiang：我觉得你最好不要加，我加过抗霉菌药物后细胞生长很慢，而且形状也发生改变，不得已重新买了一株细胞，你现在可以先把细胞冻存，将培养箱消毒后继续进行实验。

lingzhiting：最好不要用吧！我用过nystatin，40Iu/mL。霉菌没长起来，不过也许是不溶的缘故，细胞生长很慢，而且还引入了不明杂质，洗了几次，才逐渐洗去。

wuguojun680510：如果没有长真菌就不要加抗真菌药物，因抗真菌药物有较强的细胞毒性，加了结果会适得其反。最好能把环境处理一下。

qianyimei：星期一复苏了一支细胞株，养到星期三还好好的。心太急。老希望它能长的快些，所以，将一瓶配成三瓶用，结果倒好，今天早上一来，就发现里面长了很多成团的碎片状的东西，众师兄都说是霉菌，叫我倒掉，好可惜，好郁闷！早知道就不换液了，这一换，全军覆没。那位能有更好的办法吗。

zhaoqingshan：用含双抗的PBS洗几遍，换上好的培养液（比如用点好的胎牛血清）；每天洗1-2次，只要细胞状态还好，洗几天，就能把霉菌去除。然后，检查霉菌污染的原因，清除污染源。zjuaxiu：根据经验霉菌污染了用双抗的pbs冲洗基本是没什么作用，只能是浪费双抗pbs时间

zhaoqingshan：那只是说明你的经验，不巧的很，我的细胞(细胞很娇贵，培养液价值约10元/ml)去年七月霉菌污染了一次，全部抢救过来。不可否认很多时候是抢救不回来，前提条件是早发现污染，霉菌对细胞还没有构成太大伤害时候，是可能抢救回来的。当然，最重要的是不要有污染了，预防最重要，即无菌观念要强。

flyingpumc：用3微克每毫升的两性霉素杀杀试试!!!

eweiren：如果不是唯一的一管细胞，我觉得没有必要费这么大力气去挽救，因为有了霉菌，基本上是无法去除的，通过换液只能达到抑制真菌的生长，在镜下看不到不代表不存在，只是由于少或者芽孢看不到，一段时间后它可能还会出来，耽误试验啊！

zhaoqingshan Re:碧海娃娃

双抗PBS是指含有双抗(青链霉素)PBS（磷酸盐缓冲液，也不能杀死霉菌，杀霉菌应该用两性霉素或制霉菌素），使用双抗PBS冲洗仅仅是预防其它细菌的污染而已。

Re:eweiren ，你说的是很对的，真正严格的实验是不应该有污染的。

细胞株拿来后，传代几次，细胞多了，就应该冻存一些，一方面以免细胞传代次数多了变成非二倍体或者其它变异，另外就是以防污染。如果自己培养的原代细胞，可以挽救一下试试，大部分情况是难以回天的，看运气了。

不过，我那次污染正是霉季，一般实验室在这个时候，可能就不养细胞了，我们实验室是我们院里无菌观念最严格的一个实验室，在这以前，细胞从来没有污染过。那时候可能是因为空调很久没有擦洗消毒了，而我又太大意，因此感染霉菌了。不过，那次我还真的就救回来了，因为我的培养液中，营养条件特别好，而且我每天洗几次，换液，细胞没有任何的受影响的表现，我做的是原代细胞传代到第三代，刚好该做实验，因此就全部用来做了同一批的实验。

避免真菌污染的几个措施：

1、严格的无菌操作;

2、无菌间定期打扫、消毒，保持干燥；

3、各种培养液、培养器皿的严格消毒；

4、温箱中消毒水中放置过饱和的消毒的磷酸氢二钠或者硫酸铜。

eyeball：霉菌污染了用双抗的pbs冲洗基本是没什么作用，只能是浪费。关键是液体一定要保持无菌。培养液过滤后要取一点先放培养箱预培养三天，无菌生长后再用。

dongshiwu：我曾经就回来过遭霉菌污染了的细胞。如果细胞好养或有存货的话，干脆从头作起，要是舍不得可以用PBS液洗3遍，在新的培基中加两性霉素。

XTYang：最好弃掉，要不在以后的培养基中加Invitrogen公司的Fungizone，多换几次后也可。

wangfx_vet：我最近养的细胞总是出现空泡并且不断死光。改变血清浓度也没有用，不知道怎样解决

俺来了：是不是排出污染，比如霉菌包子感染可能这样，因为我的前面一批细胞就这样，培养基不混，细胞内有很多空泡，且可见一些比细胞大得多无明显细胞结构的“圆形细胞”里面有很多小的空泡，如果是这样的话，那就是霉菌污染，但愿你的不是，否则，什么都得重来！

wangfx_vet：对对！就是楼上老师说得那样！那末说我的细胞是污染霉菌了！！！？？？那我就惨了，这是引进的细胞哎，没了就永远没了！没有拯救的办法吗？

hkai97：霉菌污染是很烦的问题,试试杀霉菌的药物.这只能是死马当活马医了.重要的是预防.常做清洁和消毒,保持实验室的洁净度.否则还会出现细胞污染.

doctormeng：谁知道细胞培养血清中出现黑焦虫，该怎么办？ 有没有专门对付他的东东，比如抗生素之类？我养的细胞中出现了：中间一个黑黑的东西，其四周包围有象棉花样的的东西，不知是不是黑浆虫。其周围的东东，有点类似于菌落。 

huiql：我以前也遇到过这种情况，估计可能是真菌污染，慢慢地培养液就变混了，有人说用制霉菌素在刚出现时可以制服，但我没有试过，听说南方的真菌污染和北方的不一样，这种可能属于南方的。

义超：先需确定到底是何种微生物，可以去微生物科做细菌培养来确定。如果是真菌，细胞又实在很难得，可在细胞培养液中加入二性霉素D来挽救，也许有用。

hantian：黑胶虫好象不是诸位描述的样子。我碰到的黑胶虫有点类似与杆状细菌，但长度比细菌长，而且会左右摆动，甚至游动。这是血清中带来的，不属于细菌，普通的抑菌方法是没用的，而且他长势很快，所以遇到这种情况只能倒掉。也有人说，进口血清中的黑胶虫要甚与国产血清。

ph123：同意楼上的意见。我亦在细胞培养中遇到同样的问题,胶虫成熟后呈线状,可以快速移动,一般由血清中带来,如果发作的话只有把细胞弃掉,而且要赶快换血清。但你描述的情况还不能肯定是胶虫,可以通过培养,在油镜下观察一下,看是否是污染. 另外如果你观察到的情况没有发展,细胞不受影响的话,亦可能是血清中的纤维蛋白沉淀.

icesugar75：As far as I know, the black cluster is mostly 霉菌, since I encountered it before. But you could know it quickly if it is 霉菌, becaue 霉菌 is growing very fast, finally showing up in unclear appereance

csdoctor：听协和基础所的陈实平老师说，她并不认为真有什么黑焦虫。

icesugar75：一般霉菌很难控制，一天或是两天就长起来了。如果刚刚怀疑有霉菌，加双抗可能会好使，但说实话，刚刚开始要想判断是不是霉菌真是太难了，当时的霉菌类似死细胞，两三个小团在一起，暗的，如果不是特别有经验，很难说是不是。所以如果发现有小黑点，取出一点放入37度培养箱中一天就知了，而把余下的血清冻好。如果运气好，双抗会管用，不好就扔了吧。

lim99011：双抗好像对霉菌没有用吧?我好像记得霉菌用的是两性霉素,双抗没有作用的.

zzy8896：一点经验之谈！我在养pc12细胞时出现过这种情况，我的细胞也是莫名奇妙的出现，而且过几天后，细胞活力状态明显下降，最后死亡，但不同于一般的细菌和霉菌。我请教了许多人，没有结果。我试用g418加在培养基中，养了一阵子，后来就消失了，但你要摸一下浓度。到现在我还是没有搞清楚什么原因，可以试一下。我倾向于它是一种特殊的细菌

ronic：我也觉得双抗对霉菌没有用，加抗真菌的药试试看了，不过好像很贵，而且细胞对它的耐受性比较差。

Yong：建议慎用G418，除非你的细胞有抗性

happywind：养原代，不幸4天后发现多瓶惨遭霉菌毒手，有一瓶细胞贴壁挺好，且菌丝没有沾在瓶底上，因此我想试着救救这瓶细胞，换液，反复冲洗，最后再放进孵箱，结果过了两天，培养瓶里的细胞竟然长的挺好，没有丝毫霉菌污染的迹象。难道这样也可以！

kaize：不知污染的细胞的一些基本特性会不会改变

chelonian：但是这样的细胞，做实验结果可信吗

Skyhawk：这是我们实验室细胞培养出现的不像霉菌，不像死细胞的东西，培养越久越多，看看大家是不是也遇见过，是什么呢？什么原因引起的？

（图：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1650849&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#1650849）

以上图片取自转染有目的基因的cos7细胞，是在用G418筛选时出现的东西，不同细胞都有（vero细胞也是），我的师兄和师姐都出现有类似的情况，但我的细胞没问题（和师姐的实验目的一样，只是我是自己另外准备培养基的），目前他们都挺困惑的，希望得到dxyer的帮助！？

taolt：我感到是真菌污染，肯定不是培养液解冻后出现的东西。我们这里配好的培养液都先冻到－20度，等用的时候再拿出来用，已经有4－5年了，从来没有见过这样的东西。我有一次也是感染了真菌，与你的照片很相似，而且在早期并不影响细胞的生长，甚至细胞长得速度更快了。这可能是因为有的真菌会分泌一些能促进细胞生长的因子有关。加些抗真菌药物，要是不重要的细胞就扔掉吧。再看看细胞孵箱里有没有真菌斑！

Skyhawk：我们一般都是把培养液配成1X，过滤后放4度保存使用。所以，应该可以排除是培养液冻溶的问题。培养久了，细胞生长状态不好了，但培养液没有变浑，不像是细菌污染。真菌污染倒很有可能。谁有类似情况的照片放上来看看？

曾经用不含抗生素的培养基出现过细菌污染，反复用双倍抗生素的PBS洗后，用含抗生素的生长液培养，不再出现污染。看来这个方法可以用于一般的细菌污染的解救。

如果是真菌污染，我想可以用类似的方法，但抗生素要用相应的抗真菌的。勤换液。但这个方法适合在污染不是很严重的时候用。

helenm：培养的细胞有轻度的霉菌污染，有办法补救么？ 这可是我辛苦养了两个月的细胞。

iris_cql：以我以前养各类细胞的经验，出现霉菌的最好补救方法：

1、重新配置所用的全部培养液、PBS、消化液等，确保无菌！

2、用双蒸水洗细胞1－2次，然后在用PBS洗细胞1－2次。记住动作一定要轻柔！后换上新配的培养液！

3、彻底打扫细胞室，培养箱等。

little_G：偶的经验是，如果发生霉菌污染，最好是马上检测，一般轻微霉菌污染对检测结果的影响不大。至于想解救，你想想用什么抗菌素能行呢，除非你用复康唑，那也难说好用。最好彻底重来，只要不影响别人的和自己的其他细胞就算万幸了。

小样－菜鸟跑路：霉菌污染是不是培养基一定变混浊？霉菌能进入细胞吗？在我印象中是培养基变得很混，能见到白色的菌丝之类的，细胞状态不是很好。可是有人说霉菌污染能进入细胞，是真的吗？

loyal1006：霉菌污染后培养基不一定会变混，是否变混要看霉菌的生长速度。霉菌污染肯定会影响细胞生长，最终结果是导致细胞脱落、死亡。霉菌较大，污染后很容易在显微镜下看到大量的典型的霉菌丝。

angel2004：我的细胞被真菌污染了，有什么补救措施

sonina你用两性霉素处理，最好作抑菌试验，确定使用浓度。之后，用两性霉素的培养液培养一代，如果霉菌消失，换用正常的培养液（即没有两性霉素的培养液）培养一代，如此反复3次，确定没有霉菌后，以致可用正常培养液培养。这样太浪费时间，最好还是弃掉污染的细胞，重新复苏新细胞。

zhanghong38：我是一个试验新手，现培养血管内皮细胞，反复遇到霉菌污染问题，已试过用酒精和新洁尔灭试擦孵箱，但均不奏效，恳请各位师兄师姐不吝赐教，感谢。

topgun：关于污染的问题，这涉及几个方面的因素：操作，超净台、孵箱。

（1）操作：做实验时应养成无菌观念（操作前用70%酒精檫手，实验时如吸管等物品接触到台面应立即更换，并隔3-5分钟用酒精灯烧灼吸管）。

（2）超净台：如果超净台使用时间过长（3-5年以上），应及时更换滤板。消毒的紫外灯管也按时更换。在操作前用酒精或新洁尔灭檫拭台面。

（3）孵箱：怀疑孵箱污染时，将孵箱关掉，然后用上述消毒剂消毒，之后用移动紫外消毒车将紫外灯插入孵箱照射30分钟以上。

zrzhong6519：还有注意孵箱内的水盆， 经常检查， 如发现有絮状物，立即更换灭菌水， 之前用75%乙醇擦拭， 第二天要及时察看是否彻底，不彻底在按上述方法再来。

lwangfang：我建议你们把所有的与培养相关的物品进行一次彻底的消毒，然后启动孵箱的自动消毒功能让其消毒过夜，再注意一下操作。我觉得物品污染的可能性比较大。

yoyo781206：反复遇到霉菌污染问题，最可能的还是在操作中不太注意无菌观念所致。应当要常用75%酒精消毒手，靠近火焰旁操作，注意吸管口，瓶口等不要接触到桌面或手等地方，如果碰到，尽可能弃用吸管，或者在火焰上烤一下。超净台也是关键的，每天使用前消毒30分钟，用完也应当消毒30分钟。孵箱，已试过用酒精和新洁尔灭试擦，应该可以视做是安全的。个人观点

ahui：主要考虑手的污染。

狮心：霉菌反复出现，还有一个问题要注意：环境湿度，必须注意除湿，长期不用的东西，使用前必须从新消毒，把冲洗消毒和培养分开

liuxiaohua889：以前是否养细菌?可以全面消毒再作,有条件换培养箱,无水的较好

miffyqx：感觉有细胞污染了，于是很不放心，请问染菌的培养瓶再污染别的瓶里细胞，直至污染整个培养箱里东西的几率有多大？以前听说过会这样的

香山雪林：你的培养箱采用什么样的抑菌方法？我现在采用的是：水盘中装饱和的硫酸铜溶液（无菌水配），有资料说可以增大保险系数。

miffyqx：我们的做法和你们差不多：饱和硫酸铜溶液配制后，高压蒸气灭菌，放在水盘里。这样很有用是吗？特别防箱内染菌？？

shyaroom：霉菌污染会染坏一箱子细胞，因为霉菌会飘，但细菌不会的。

yuefeiyf：硫酸铜只是保证水不长菌，对其他地方无效。

路遥只要抢救措施及时应该不会有大问题，我的细胞出现过霉菌污染，但及时用苯酚消了孵箱，用甲醛重熏了培养间，没出什么大问题．

pipi： CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。

gongqiang：孵箱霉菌污染，经新洁尔灭及酒精彻底擦洗数次并紫外照射灭菌处理，仍有霉菌滋生，恳求高手出招解救！

203040：天气炎热，霉菌也开始肆无忌惮的繁殖。想想去年这个时候，也被霉菌折腾得郁闷无比。还好后来控制住了。经验如下：

1、细胞培养室大扫除，水池、吸引器中的引流瓶等无一不是霉菌孳生的地方。然后室内进行紫外灯照射杀菌。

2、培养箱消毒时是否注意了里面的几层钢板。紫外线照射时得拿出来。我当时干脆就放到180度烤箱里考过夜。

3、处理培养箱时还有个要考虑的地方，培养箱内的细胞培养瓶。重新放回去的时候得用酒精将瓶周搽洗数次，能换掉更好。

4、培养箱搽洗时重点在箱底的四个角落。

碰到顽固的霉菌孳生时的确很伤脑筋，最夸张的时候消毒第二天箱底就看到白色的点装物。总的原则就是彻底的杀、杀、杀！当时我就是这么处理的，后来情况大为改观。你可以再试试。

gongqiang：谢谢！我已经和霉菌奋战近一个月，我总是失败者！上述方法：如将培养箱能拆下的都经高温高压消毒，各个角落每天新洁尔灭、酒精擦洗，都不行，辛苦不敢说，努力总没结果！

amwwxf757：你应分析一下每次成功和失败的原因，用本子记下来。操作要细心。请一位有外科经验的人给你看一下是不是有漏的地方没有消毒好。全面包括各种试验品和培养器。

flyingpumc：因为霉菌有孢子的存在，所以酒精，新洁而灭，紫外线等等根本不可能去除霉菌！我们原来用过国外带回来的一种试剂稀释后可以用来抑制霉菌，但是我们没有发生过霉菌污染，所以不知道效果到底怎么样？而且这种试剂可以稀释后直接放在孵箱内，此试剂对细胞没有毒性！具体是什么我也忘了！！你自己好好查查吧！应该会有这种试剂卖！

zjuaxiu：有带消毒程序的培养箱，很方便。

jzyxynwm：整个培养间用福尔马林和高锰酸钾熏蒸,孵箱内部包括托盘等全部用苯酚搽洗,封闭2天,基本就没问题!!但培养良好的无菌观念是前提！真菌多数是空气中悬浮污染，所以除紫外线照射外，每次进出培养间要用来苏或者新洁尔灭搽地，减少空气悬浮颗粒及细菌！！

开心的水：一周清洗一次，75％酒精擦洗，再将温度打到94度持续3到4分钟。

wangyibo：孵箱内托盘的水中加一些硫酸铜可抑制霉菌。

无影剑客：做原代培养，20多天后已经传代或要传代时几瓶细胞均出现局部黏附在在瓶底的葡萄状漂浮物,摇晃后会有部分脱落。有两瓶突然出现浑浊，镜下找不到细菌。换液后漂浮物较前增多。疑为霉菌污染。原代培养做的好辛苦，突然发现大面积污染，最近一两个月的工作就要化为乌有。请教已经出现的污染有没有办法弥补。两性霉素B如何配制、贮存及污染后的最大应用剂量。

youngtiger：做原代培养出现污染原则上应遗弃细胞，但鉴于你的个人原因及我以往排除污染的经验，现给出以下建议：两性霉素，浓度范围1-50ug/ml，常用浓度3ug/ml；制霉菌素，浓度范围1-500U/ml，常用浓度50U/ml。两者任选其一。

Pathway：建议楼主楼主试一试用96孔(或48孔)细胞培养板来培养;这样局部的、偶然的污染不会使实验全军覆没。因为我也经常要做原代培养，一般会同时接种细胞培养皿和96孔板。因而有时会出现这样的情况：5块96孔板总共只有4、5个孔污染了，但所有的细胞培养皿都污染了。从来没有发现细胞培养皿没有污染，但96孔培养板却污染了（至少目前是这样）。对有污染的培养孔，我一般用8M的NaOH处理（加热至70－80度，污染也从来就没有扩大过）。总之，原代培养出现的污染多是机会性、偶然的，使用96孔或48孔细胞培养板是一种很好的控制污染的手段。（说到底是一种机械的、行之有效的隔离措施）

loyal1006：已出现污染一般是无法挽救的，两性霉素、制霉菌素也只能是预防污染，或许在污染的早期还有一点作用。目前关键是要找到污染源，以防下次再污染。

qingshi：这段时间大量养细胞，呵呵，880多个，那个多呀，可是竟然出现霉菌和酵母污染，于是，消毒处理，可是，污染照旧，于是大胆决定，撤掉水盘，呵呵，果然效果良好，已经20多天了，一切正常，顺便说一下，我同时养的悬浮、贴壁。加入10ml培养液，3天换液，没问题。

Pathway：楼主不是同时养880种细胞吧？而是用了96孔培养板养了多种细胞吧？我觉得国内还没有那个单位和公司能同时养880种不同的细胞。另外，不要水盘的话，楼主怎么保证培养箱内的相对湿度呢？（培养箱内的高湿度和温暖的环境确实是最适合霉菌生长的），我的培养箱内也可见长有很多的霉菌，但会引起细胞培养瓶内的细胞污染的可能性却很小（即使使用细胞培养皿和细菌培养皿也是如此）；不过，由于我的培养箱可自动消毒，我一般每个季度都会消毒一次。

qingshi：no。贴壁细胞无法用96孔板，当然不会一次性培养880种，而是持续培养，一般维持在80多个，使用50ml的培养瓶。我也担心湿度问题，但是没什么大问题。

小毒物：我正在养细胞,一开始有10瓶,不断的养,不断的有真菌污染,现在剩下4瓶了.因为也并不是所有细胞都出现污染,大家帮忙分析一下应该注意哪些问题?

juju：真菌污染是细胞培养过程中常见的问题。首先，环境需要清洁，超做台每天用新洁尔灭清洗是必要的。然后在培养基中适量添加制霉菌素，和两性霉素可以抑制真菌及其他霉菌的生长。再者，超做时加以注意。应该对你有帮助的。细胞培养过程中常见的问题建议你可以看看“细胞培养实验指南”一书。里面有更详细的讲解。

mlfyandw2002：最好的方法就是丢掉它,然后用甲醛熏蒸,再就是集体放假一个星期.再回来重新做过.

小毒物：谢谢两位,我已经将孵箱用甲醛熏过一次了,每次照台子之前用酒精擦台子,紫外线照30分钟,操作也很注意,但还是不能幸免遇难,看来要加制霉菌素等试试看了

fairyland：最近培养筛选细胞频频污染，以前操作还没有现在认真，细胞一样长势旺盛，一点问题也没有。现在越是小心谨慎，却总是污染，即使第一二天没有污染，时间稍长就出现了。其它同学有时有，但我出现的次数最多。一种是一小团一小团褐色成致密网状，一种是如同芽孢状，一串一串的。细胞筛不出来后面的试验根本就无法进行，真是心急如焚，大家帮帮忙吧！

gsy1234：严格保证泡酸，消毒过程！，换血清和重新配培养基！我有过类似经历！这样处理后就没出过问题！舍不得孩子套不住狼！麻烦一点，总比浪费时间和金钱重要！

weric：你的问题很严重, 且强烈怀疑有fungi 污染(是如同芽孢状，一串一串的), 所以根本解决之道, 先把 CO2 incubater 以酒精和抗 fungi 药物擦拭, 铁盘拿去灭菌. 然后所有 mdium PBS 重新配制, 最后重新解冻新细胞来培养

zhizuchangle：最好来一次彻底清洗，包括培养箱水盘和无菌室，所养的细胞全部高压后弃去，水盘别忘了加点硫酸酮，可以防霉菌。若是怀疑培养液污染，可以在每次配液时先装一小瓶观察，直到确定无污染再使用！

ssmu_fruit：不必太紧张,这种经历养细胞者一般都会有。瓶口不要太松(防止孢子飘入),放入培箱前瓶口烧一烧,瓶身用酒精棉擦拭一下。培基等过滤过的液体不必扔掉(0.22um),没有问题。培箱开启前大家都用酒精消毒手,避免不必要的污染。要保证冻存的细胞未经污染.

紫水晶：我最近养CHO-HUK细胞，这一个月来总是污染，有时是细密的东西，像是细菌；有时是霉菌，刚过滤的2000ml培养基都污染了，可以明显看到白色的菌落生长；再就是我的胎牛血清过期了一个月，发现里边有许多漂浮的异物，在镜下看是许多弯曲的东西，在孵箱里培养一天便混浊，应该也是细菌污染。我想请问：血清过期和污染有没有必然的联系？在这样潮湿闷热的天气里应该怎样预防和控制污染，大家有什么好办法？

little_G：可能的原因：

1、天气太热，实验者在培养和接种或者换液时出汗（有空调稍好，但是手也出汗）。

2、培养间里可能暗藏污染原。

3、注意培养箱（这点最重要），仔细检查培养箱里的隔板的下面，有可能有霉菌斑。（我遇到过）

4、培养基污染多数是配置过程中造成的，仔细检查配置过程用到的器具。

5、血清过期一个月，如果保存的好应该没有问题，但是保存不好，新来的血清，用一次就可能污染。血清过期和污染是否有必然的联系不好说，个人体会觉得其联系不大。

解决办法：

1、彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。

2、彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。（4）紫外灯长时间照射（一天）。

3、实验用器械消毒：注意消毒时间和压力，有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。

4、一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。

5、如果用双抗，应该现用现配。

6、注意过滤器的消毒灭菌。

7、过期的血清，可以做培养检查是否被污染。如有怀疑，建议不用。

8、检查培养间和超净台的通风过滤网，如果脏了，需要更换。

总之，潮湿闷热天气培养细胞非常容易污染，必须注意每一个环节。具体的可能造成污染的环节，还得要自己体会查找。

hdfi8d：

1、用碘伏仔细擦洗浮箱和操作台，地面，然后用紫外灯照1小时

2、处理完细胞放回浮箱是用酒精棉擦培养瓶的底部

happywind：我的一瓶价钱不是很贵的血清，用后总是发现培养基中有很细小的类似细菌污染的东西，但是培养液又不很快变浑，不像细菌污染，细胞长的也慢，现在想想也许就是血清的问题吧，养细胞血清的选择还是很重要。

避免污染，我认为：

1、每次做完实验，超净台要用酒精喷擦；打开紫外线照射；

2、严格无菌操作；

3、孵箱定期清洗，换水；

4、每次观察细胞后，酒精喷瓶口；

5、培养瓶最好放在一个托盘上，然后在放入孵箱。托盘是高压蒸汽消毒过的。

limengqiang：防止细胞污染很简单，只要按照外科手术的操作原则进行无菌才操作，保证污染不了。

olivezrp：还有 一个 问题，就是血清用之前是否灭活过。很多公司的血清 ，分装 之前 需要灭活，不是一定要灭活 的，但如果 你 没有 灭活，即使没有污染，镜下也 可见 许多 漂浮物，一般为 衣原体、支原体等，建议血清分装前，56度水浴 灭活30分钟。

guanping：倒置显微镜一般是看不到"许多 漂浮物，一般为 衣原体、支原体等"的,关于血清污染:买回来后(进口的一般不需要灭活),溶解后分装一小瓶,培养箱里72 h 以上,即可看到污染与否(没有污染的应该是透明度很好的).如果有问题,就退货,没有话说.如果发现溶解后即可看到明显的漂浮生物,呢就不用我说了。使用过程中,最好分成小瓶,用个1 周左右,4 度保存!反复冻融,对其效果和性状有影响.

brisk2004 ：我最近也碰到了这样的问题，养的815细胞总是污染，把培养基，胰酶等什么都丢了也不行，后来我发现培养箱里面长霉了，清洗灭菌之后才没事了。