多重磁珠阳选方法

1. 分选原理

源自德国 IBA Lifesciences 的多重磁珠阳选，选后细胞无试剂残留（即 label-free）的特性，非常适用于分选一些需要用多种 marker 才能准确鉴定的细胞，如 Tcm，Tn，Treg 细胞。假如现在我们想用 CD8+CD62L+ CD45RA- 这几个 marker来分选 Tcm 细胞，首先我们可以通过磁珠法阳选先得到 CD8+的细胞，将分选得到的细胞上结合的磁珠等分选试剂去除后，再分选出 CD62L+ 的细胞，这样获得到CD62L+CD8 + 的高纯度 T 细胞靶标群体。最后去除掉 CD45RA 以进行分离得到 naïve 或 memory (CD45RA-) T 细胞。

2. 实验流程

Step 1：CD8-Fab 片段能特异性识别细胞表面的 CD8 抗原分子，Twin-Strep-tag^® 通过与Strep-Tactin^® 多聚体结合后，抓取到 CD8+目的细胞。Strep-Tactin^® 多聚体上连接磁珠，即可通过磁极分选出 CD8+ 细胞。

 

Step 2：通过加入生物素，竞争结合掉 Strep-Tactin^® 多聚体。一旦 Fab-Strep 离开多聚体，单体 CD8-Fab 会因亲和力降低而自动从细胞上脱落，这时候我们就得到了真实且不带任何分选试剂的 CD8+ 细胞。

Step 3：用分选得到的 CD8+ 细胞再进行 CD62L+ CD45RA- 细胞的富集，以及分选试剂的去除。如此以来，就能通过阳选的方法得到真实、高纯度、无磁珠与试剂残留的 Tcm 细胞。

 

流程图：

 

3. 实验数据

 

Figure: CD8 +CD62L+ T 细胞的多重分选

将细胞与 CD8 磁性 Fab Streptamers^® 孵育，以预选 CD8 +细胞，后加入 biotin 以进行阳性分选。将所有分选试剂移除后，第二步即可从预先分选的 CD8 + 细胞中使用磁性 Fab Streptamers^® 进行 CD8 +CD62L+ 细胞的富集。图中显示了两步骤相应的阳性与阴性组分