纯化后的蛋白质怎样保存?
IBA生命科学
在辛辛苦苦进行了表达和纯化目的蛋白后,我们不免会面临另一个问题:如何储存纯化后的蛋白呢?如果不加注意,就会有前功尽弃的可能。
首先,储存方法的选择取决于蛋白质的稳定性,以及后续实验使用蛋白质的时间和用途。储存时需要避免接近蛋白质稳定极限的储存条件(例如极端 pH 或者接近蛋白质等电点的 pH)。
其次,避免添加会干扰后续实验的成分。
保存方法
大多数的蛋白质可以保存在 4°C。
2. 在 4°C 超过 24 小时
需要考虑对蛋白样品灭菌过滤(使用 0.22 µm 过滤器),或者加入抑菌剂(例如 0.1% 叠氮化钠)以避免细菌生长。值得注意的是,并非所有蛋白质都能在 4°C 长时间保持稳定。
3. 长期保存(一周以上)
需要将蛋白样品冻存。使用液氮或者干冰/乙醇混合物将其快速冷冻避免蛋白质变性。可以将样品分装至多个管子中,来避免反复冻融可能造成的活性降低或影响结构。
可以添加几种稳定剂,如甘油(5 - 50%(w / v)),血清白蛋白(10 mg / ml),还原剂(例如 1 mM DTT)和配体(其性质和浓度取决于靶蛋白的性质和浓度)。
4. 保存几个月
可以将其保存在-20°C,并加入 50% 甘油避免冻住。
5. 保存几个月至几年
此时应把样品在-70°C 或液氮中冷冻。在这种温度下,加甘油就没那么有必要了,但加 5 - 50% 的甘油可以帮助保持蛋白质的稳定性。
6. 其他储存方法:
4°C,在硫酸铵沉淀中保存。
冻干的形式保存:在 4°C 或更低温度下。要冻干保存的话,须将蛋白质溶在挥发性缓冲液(例如三甲胺/ HCl;pH 范围 6.8 - 8.8)中。而且需要注意,并非所有蛋白质在冻干过程中都是稳定的。