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5 分钟搞定一只 MCAO 模型老鼠,你敢信?

丁香园

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MCAO 实验全称即大鼠中动脉阻塞实验,是脑缺血常见动物模型。科研一线的小伙伴是不是每次做起来 MCAO 实验,都是腰酸背痛腿抽筋,哈哈,教你几招迅速搞定老鼠君们的办法,让你分分钟飞起来~~


首先,你得有 helpers!MACO 实验简单分为几个步骤:麻醉 + 钝性分离 + 插线栓 +(拔栓)+ 缝合【如果需要 Reperfusion 则需要拔栓,否则直接缝合就行~】


敲黑板!以上 5 个步骤都需要一个 helper,流水线操作,一只老鼠待在每个小伙伴儿面前不足 1 分钟,保证实验既快又有条不紊! 其中插线栓最重要,需要一个熟练的厂工!


为了进一步使实验做起来更行云流水,下面的小建议或许更有用!

Tips:


  1. 1. 工欲善其事必先利其器,做实验前首先得有自己的一套家伙什儿吧~~


哈哈,我来抖抖自己的宝儿~~ 找到一套适合自己的实验工具,即使失败了,也不能怪工具了(只能怪自己 chun,三声~)。



关于线栓:目前主要有硅胶和多聚赖氨酸两种材质的线栓。强烈建议大家采用硅胶线栓。这是因为多聚赖氨酸对血管内皮细胞损伤严重,容易引起血小板聚集,导致血栓形成,形成永久性血栓,如果需要 MCAO/Reperfusion,模型就会不成功(科研要严谨!)。


  1. 2. 性激素对脑梗死面积有较大影响,应采用单一性别的动物进行实验(并没有性别歧视哈,我还是觉得雄鼠比较好上手!)。


  1. 3. 动物的麻醉也是重中之重。如果试剂及剂量合适,麻醉一次完全可以撑下来整场比赛!咳咳,实验!但如果不合适,鼠君们有可能长醉不复醒,也有可能正做着实验,它们给你来个鲤鱼打挺~~


目前常用的麻醉剂有:异氟烷(安全性高,撤去麻醉面罩后,动物 2 分钟可醒,但是需要配麻醉机,并且异氟烷损耗大,成本较高);水合氯醛(安全性较好,控制好量可以连续麻醉 3h,缺点是误打入肠道后可引起肠梗阻,导致动物死亡,动物的体温下降比较明显,需要控制好动物的体温)。


  1. 4. 分离肌肉真的是件功夫活儿!分离时要层次清楚:正中剪开大鼠颈部皮肤,分离皮下结缔组织时直接在正中两侧鼓泡腺体之间分离,这样能不损伤腺体造成过多出血。下一步是分开颈前肌群,注意用小剪刀作撑开分离动作,在左右肌肉块之间,这样能保证不会出现较多条细肌纤维条,并且能整块地向一侧牵开颈前肌群暴露颈动脉鞘。之后则要注意细致分离迷走神经,若损伤则可能影响其呼吸而死亡(若术中听见老鼠突然呼呼的憋气式的大口呼吸,恭喜你,成功碰到了迷走神经,后果你是知道的……)。


  1. 5. 分离血管时,千万别分心!要尽量将血管剥离的干净些,这样在用眼科剪剪口时就不会误剪外膜(误剪的话再剪就很容易把口剪大了或者剪断了,要注意口子越小越好插线),且要剪一个斜行的切口(这就是为什么我的眼科剪是弯的原因…… 咳咳,说剪子的呢,不是说我!),这样容易插入栓线。当然,切勿牵拉过猛,以免使血管发生痉挛,导致栓线不能顺利进入(此处千万别显摆自己的力量!)。



  1. 6. 栓线进入后颈内动脉后即可逐渐插入了!有时候很顺利一插到底,但有时候在中间就怎么也进不去了,这是因为在血管入颅穿过颅骨时有一个狭窄。因此,碰上这种明显阻力时,一定不能盲目向前使力插,越插栓线前端变形越进不去且容易损伤血管。正确的作法是往外抽出较多栓线,也许会有一定的动脉血流出,不要慌啊亲们,只要顺着血管走向(颈内动脉的走向为内上方)调整一下进线角度轻柔的使劲,一般都能进去!(此处也不宜显摆自己的力量!)。


  1. 7. 栓线不能在血管里反复进退,否则及容易造成蛛网膜下腔出血,而且很容易误解为模型成功,因为这时的神经功能改变也很明显,但并不是由于栓塞引起的(三思而后行,别拉拉扯扯太多哦~)。


  1. 8. 动物的保温也是不可忽略的细节!术中和术后都要采取保温措施,术中可以采用电热毯(没错,就是你妈小时候给你买的那种红杠的~),术后可以用棉花等~~



当然有的小仙女喜欢碎花,我觉得也可以吧,反正人的审美也无法轻易被改变 (老鼠喜欢碎花么,你们这些擅自做主的人类)……

说了这么多,大家还是要勤加练习呀,我走过的老路,不希望仙女们再走,祝大家开心~~

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