大家好，我是一条佛系的 lncRNA

我是一条非编码 RNA。

顾名思义就是一条只转录而不翻译成蛋白质的 RNA。

在我成名之前，我经历了漫长的等待与误解。所有人都称我为垃圾，暗物质，他们以为只有可以编码蛋白质的 RNA 才是对机体有用的 RNA。呵呵，too young too naive。但作为一条佛系的非编码 RNA，我也懒得解释，一切随缘，而且我相信，是金子总会发光的。

终于，属于我的春天来了，我们非编码 RNA 家族的功能被大家所发现，家族的成员被不断的发掘，我们终于从幕后走到了台前。

看着兄弟姐妹们一个个的被研究，完成了作为一条 RNA 的使命，我这颗静如止水的心也按捺不住了，我也渴望被发掘，我也渴望被研究，我也渴望完成我的使命，让大家深入的了解我。终于，机会来了，一位年轻的科研工作者从众多的 RNA-SEQ 的数据中发现了我们，进行不同时期的实时荧光量 PCR 的检测之后，他决定对我这条期特异性表达的非编码 RNA 进行研究。

我终于守得云开见月明，有了被研究的价值。由于我的长度大于 200bp，所以我的主人称我为长链非编码 RNA，简写为 lncRNA。我很喜欢我的名字。

然而研究的过程并非一帆风顺。

我的主人首先需要确定我的全长序列，研究我们的人都知道，目前确定我们全长序列的方法只有一种，那就是 cDNA 末端快速克隆技术，简称为 RACE 技术。

但是由于我们非编码家族的 AT 含量较高，对于基于 PCR 技术的 RACE 技术来说，这是一个不小的挑战，看着我的主人为了得到我的全长日夜奋战，我既心疼又感动，终于，功夫不负有心人，我的主人通过不懈努力得到了我的全长序列，并通过 Northern Blot 实验验证了 RACE 实验的结果。

研究我的第一个拦路虎被主人拿下，我的全长序列第一次毫无保留的呈现在研究者面前，我们都很激动和开心。

有了我的全长序列，接下来的研究就顺理成章了，我的主人构建了我的过表达质粒，观察了我过表达之后的表型。这是比较常规的做法。

让我惊喜的是我的主人敲除我时，用的是现在大热的 crispr-cas9 技术，这让我大开眼界，之前我只知道 CRISPR 簇是广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊 DNA 重复序列家族，其全称是成簇的规律间隔的短回文重复序列，由重复序列区和间隔区组成，间隔序列区为俘获的外源 DNA 序列，当这些外源遗传物质再次入侵时，CRISPR/Cas 系统就会予以精确打击。

如今科学家们根据此原理设计了 CRISPR/Cas9 技术进行基因编辑，在目标基因的上下游各设计一条向导 RNA，将其与含有 Cas9 蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中，向导 RNA 可以通过碱基互补配对靶向目标序列，待编辑的细胞基因组 DNA 被看做外源 DNA，Cas9 蛋白使得该基因上下游的 DNA 双链断裂，从而实现目标基因的敲除。

这项技术即提高了敲除的准确性，又大大缩短了研究者的时间。可谓是省时又省力。这么高大上的技术应用于我身上，够我吹牛一辈子了。

得到了我的过表达与敲除表型之后，我的主人开始寻找与我相互作用的分子。我的主人设计了我的 pull-down 实验。即设计几条针对我的反义 DNA 探针，在探针的 3’ 端添加生物素标记。

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然后固定 RNA-Chromatin 交联。并对交联的 DNA 复合物进行超声裂解。使 DNA破碎，添加生物素标记的 DNA 探针在杂交缓冲液中进行杂交。加入生物素抗体磁珠，进行富集。然后冲洗。提取 CHIRP 中的 RNA 用于 qRT-PCR 检测，用于确认lncRNA 分子为特异富集对象，分离 DNA 和蛋白用于后续鉴定。

通过实验数据分析，我的主人确定了与我相互作用的分子信息和结合位点信息。与我相互作用的蛋白信息，我的主人运用 RIP 技术进行了反向验证。与我相互作用的 DNA 序列信息，我的主人运用双荧光素酶实验进行了反向验证。

验证成功之后，我的主人确认了我参与的信号通路，破译了我的调控机制。最终，我的功能得到了重视，我的主人的工作也得到了认同。

经历了从默默无闻到一鸣惊人，经历了与主人相爱相杀的几个年头，作为一条佛系的lncRNA，我将我的心得分享给佛系的分子与佛系的研究者。