🔥 肿瘤组织蛋白提取

蛋白质是生命体中最重要的基本组成部分之一，它们在细胞的结构和功能中起着至关重要的作用。因此，研究蛋白质的结构和功能对于理解生命体的基本机制和开发新药物具有重要意义，而蛋白质提取是研究蛋白质的关键步骤之一。

蛋白质提取的原理是利用蛋白质的物理和化学性质进行分离和提取。不同的蛋白质提取方法适用于不同类型的蛋白质。该方法为最简单的胞质、核质可溶蛋白的粗提。

预冷的 PBS、RIPA 裂解液、磷酸酶抑制剂

蛋白酶抑制剂

从肿瘤组织中提取蛋白质的操作步骤如下：

1、配置裂解液：在裂解液中按要求加入磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂（购买的商业化抑制剂使用浓度请按说明书添加）。

2、提前预冷离心机。

3、组织裂解：将 30 mg 组织在 PBS 稍涮洗后，用吸水纸吸干水分，放入 1.5 ml 离心管，置于冰上，每管放入 2 颗研磨钢珠，加入裂解液，放入研磨仪研磨，直至看不到组织。

4、离心：离心机预冷（15000 rpm，4 ℃，10～15 min）。

5、取上清，长时间保存可放置 -80 ℃ 冰箱。

1. 试剂、仪器要提前预冷；

2. 操作全程为冰上；

3. 组织取材后最好分装，避免反复冻融；

4. 研磨珠可重复使用，用酒精浸泡晾干；

5. 根据实验目的选取裂解液。如，目的蛋白是膜蛋白，可以选取 NP40 浓度稍高的裂解液，改变裂解液中的盐离子浓度；

6. 建议提前搜索目的蛋白的丰度，根据实验用量计算组织使用量。

1. 蛋白提取后可以存放多久？

答：-80 ℃，一年没有问题。但不要被蛋白酶水解掉；不要被细菌污染。组织取材后最好分装，避免反复冻融。

2. 做组织样品蛋白的 western 的时候，提取蛋白有什么特别注意的吗？

答：一定要涮洗干净组织，不要让血液中的蛋白污染样品。必须进行研磨、匀浆处理，蛋白质溶解度会更好，离心要充分，还有一点就是组织中的蛋白酶活性更强，需要注意抑制蛋白酶的活性（加入 PMSF 和蛋白酶抑制剂 cocktail）。