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🔥 穿梭箱实验(TDPA)

相关实验:穿梭箱实验

别名:避暗实验,TDPA,穿梭主被动回避实验

最新修订时间:

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合作专家 | 黄玥琳博士

生理学 大连医科大学

原理

穿梭箱实验室利用动物的好暗避光(明暗穿梭)、对厌恶刺激(如足部被电击)的恐惧和记忆而建立起来的。对于实验者而言(而不是对动物),穿梭箱实验在技术上与暗示关联条件恐惧相类似。所用的刺激为温和的足部电击,发生的反应是动物逃避曾经受到电击刺激的地方。

用途

检测动物学习记忆,以及恐惧记忆能力。

材料与仪器

明暗穿梭箱,酒精,厨房用纸,计时器。

步骤

1.用 70% 乙醇清洁所有表面区域的明暗室,并擦拭干净。确保明箱和暗箱之间的门关闭。打开室内灯,打开仪器,一般电刺激为 40V。

2. 将动物放在明箱中。等待大约 60 秒,让动物适应有光的一面,动物在明箱中自由探索。在打开门(明暗箱之间)之前,确保动物标背对门(至少 45°),距离门至少 5 厘米。这可以防止门移动时出现冲击性进入。

3.抬起门后,开始用计时器记录动物从明箱进入暗箱所用的时间(以动物全身进入为准),当动物完全进入暗箱中停止计时。

4.动物一进入暗箱就将门放下。若动物持续在明箱,没有穿梭则不再接受电刺激训练,将动物取出即可。

5.动物在暗箱中一定时间后,对动物进行足部电刺激。

6.在足部电击后,让动物在暗箱中停留 30s,将环境与厌恶刺激相联系,然后取出动物,放回笼子。

7.所有尿液和粪便必须从小室两侧清除,并用 70% 乙醇彻底清洁仪器,清除第一只动物身上的任何残留气味。然后,可以开始测试下一只动物。

8.电刺激训练 24h 后,将小鼠放回明箱,中门打开,但不给电击。记录 5min 内动物进入暗箱的潜伏期。正常小鼠或许能够记住前一天在暗箱中遭受的电击,因而通常不会进入暗箱(在明箱的潜伏期达到最大,即 300s );即使进入暗箱,也非常缓慢。计算机还可同时记录动物在穿梭箱内的活动情况,包括运动距离、运动时间、站立次数和时间,以及静止时间等。

图片引自:Eagle, A. L., Wang, H. and Robison, A. J. (2016). Sensitive Assessment of Hippocampal Learning Using Temporally Dissociated Passive Avoidance Task. Bio-protocol 6(11): e1821. DOI: 10.21769/BioProtoc.1821.

注意事项

1.关闭两箱中间的门时要轻柔,不要制造过多外界的声响影响动物行为。

2.实验过程中会出现动物半个身子进入暗箱,然后又转身回到明箱的情况,这种情况不要放下两箱中间的门。

常见问题

1.动物在暗箱中给予电刺激后无明显反应?

答:可能是电流刺激强度不够,一般我们的刺激条件为 40V。或者检查一下给予电刺激的仪器,是否可以正常放电。

2.有些动物不进入暗箱,一直在明箱待着?

答:像此类动物应该淘汰,不再进行穿梭箱实验检测。

来源:丁香实验

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