🔥 穿梭箱实验（TDPA）

穿梭箱实验室利用动物的好暗避光（明暗穿梭）、对厌恶刺激（如足部被电击）的恐惧和记忆而建立起来的。对于实验者而言（而不是对动物），穿梭箱实验在技术上与暗示关联条件恐惧相类似。所用的刺激为温和的足部电击，发生的反应是动物逃避曾经受到电击刺激的地方。

检测动物学习记忆，以及恐惧记忆能力。

明暗穿梭箱，酒精，厨房用纸，计时器。

1.用 70% 乙醇清洁所有表面区域的明暗室，并擦拭干净。确保明箱和暗箱之间的门关闭。打开室内灯，打开仪器，一般电刺激为 40V。

2. 将动物放在明箱中。等待大约 60 秒，让动物适应有光的一面，动物在明箱中自由探索。在打开门（明暗箱之间）之前，确保动物标背对门（至少 45°），距离门至少 5 厘米。这可以防止门移动时出现冲击性进入。

3.抬起门后，开始用计时器记录动物从明箱进入暗箱所用的时间（以动物全身进入为准），当动物完全进入暗箱中停止计时。

4.动物一进入暗箱就将门放下。若动物持续在明箱，没有穿梭则不再接受电刺激训练，将动物取出即可。

5.动物在暗箱中一定时间后，对动物进行足部电刺激。

6.在足部电击后，让动物在暗箱中停留 30s，将环境与厌恶刺激相联系，然后取出动物，放回笼子。

7.所有尿液和粪便必须从小室两侧清除，并用 70% 乙醇彻底清洁仪器，清除第一只动物身上的任何残留气味。然后，可以开始测试下一只动物。

8.电刺激训练 24h 后，将小鼠放回明箱，中门打开，但不给电击。记录 5min 内动物进入暗箱的潜伏期。正常小鼠或许能够记住前一天在暗箱中遭受的电击，因而通常不会进入暗箱(在明箱的潜伏期达到最大，即 300s )；即使进入暗箱，也非常缓慢。计算机还可同时记录动物在穿梭箱内的活动情况，包括运动距离、运动时间、站立次数和时间，以及静止时间等。

图片引自：Eagle, A. L., Wang, H. and Robison, A. J. (2016). Sensitive Assessment of Hippocampal Learning Using Temporally Dissociated Passive Avoidance Task. Bio-protocol 6(11): e1821. DOI: 10.21769/BioProtoc.1821.

1.关闭两箱中间的门时要轻柔，不要制造过多外界的声响影响动物行为。

2.实验过程中会出现动物半个身子进入暗箱，然后又转身回到明箱的情况，这种情况不要放下两箱中间的门。

1.动物在暗箱中给予电刺激后无明显反应？

答：可能是电流刺激强度不够，一般我们的刺激条件为 40V。或者检查一下给予电刺激的仪器，是否可以正常放电。

2.有些动物不进入暗箱，一直在明箱待着？

答：像此类动物应该淘汰，不再进行穿梭箱实验检测。