根尖的离析压片法

为了观察单个完整细胞的形态结构，如导管分子、纤维或薄壁组织细胞，可用强酸、强碱或酶将细胞之间的果胶质胞间层溶解，使细胞彼此分离成单个细胞，此制片方法称为离析法。

器材：剪刀、吸管或移液器、培养皿、镊子和解剖针、吸水纸、小指管、铅笔、载玻片、盖玻片

试剂：

① 根尖、种子或营养繁殖体（如洋葱鳞茎）

② 乙醇：冰醋酸（3：1）固定液（或FAA固定液）

③ 秋水仙素、对二氯苯等试剂

④ 1mol/L 盐酸

⑤ 浓盐酸：95% 乙醇（1：1）混合液

⑥ 蒸馏水

⑦ 蒸馏水乙酸洋红染液、石炭酸品红染液或 1% 的结晶紫溶液

⑧ 45% 乙酸溶液

根尖的离析压片法的基本过程可分为如下几步：

（一）取材

可直接从植株上取根尖，也可利用种子或营养繁殖体（如洋葱鳞茎）在实验室中培养出根尖。用根尖材料观察细胞有丝分裂或者进行染色体制片，都要选择生长旺盛的幼根，剪取幼根先端包括分生区的 5~10 mm 部分。

（二）固定

将剪下的根尖放进小瓶中，加入乙醇：冰醋酸（3：1）固定液中固定 30~60 min，然后，换入 FAA 固定液中。如果在野外取材，也可以将剪下的根尖直接投入到 FAA 固定液中。固定液与固定材料的体积比应大于 20：1，材料在 FAA 固定液中可以长期保存，随用随取。如果是用作染色体制片的根尖材料，在固定之前需要用秋水仙素、对二氯苯等试剂进行处理，以便于观察染色体。

（三）离析

从固定液中取根尖数个，放入小指管中，加入 1 mol/L 的盐酸约 5 mL，在 37 ℃ 水浴中保温 60 min。如果采用鲜活材料，剪下根尖之后，可以不经固定过程，直接将根尖投入到盛有浓盐酸：95% 乙醇（1：1）混合液的小指管中，室温下处理 10~20 min 即可。为了不影响染色，根尖材料经酸解后要充分漂洗。将吸管（或移液器）插入小指管底部，尽量吸干管中的液体，不要吸走根尖材料，再充入适量蒸馏水，反复 3~5 次，最后让材料在蒸馏水中停留 10~20 min。

（四）染色

取已离析好并漂洗干净的根尖材料一两根于载玻片中央，用綴子和解剖针稍加撕裂，再滴加染液进行染色。染色可用乙酸洋红染液、石炭酸品红染液等，一般实验中观察根尖有丝分裂常采用的染液为 1% 的结晶紫溶液，染色时间为 5 min 左右。如果染色时细胞质被动着色，染色后可用吸水纸吸去染液，加上 1 滴 45% 的乙酸溶液分色，细胞质的颜色褪去后，迅速吸取多余的乙酸溶液。

（五）压片

在已染色并经分色处理的根尖材料上加蒸馏水 1 滴，盖上盖玻片，并覆盖上 1 层吸水纸，以铅笔上的橡皮头对准材料轻轻敲击，使材料展开成一均匀的薄层。在显微镜下检查压片效果，如果细胞不够分散，可再次对材料施压。要注意压片时按住盖玻片，并垂直于玻片敲击，勿使载玻片与盖玻片之间发生错动。