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细菌性角膜炎动物模型

相关实验:眼表及角膜病动物模型

最新修订时间:

简介

角膜病是主要的致盲性眼病之一。炎症、外伤、变性、营养不良和肿瘤等均可导致角膜疾病的发生,其中感染性疾病最为多见,约 20% 的盲人是由眼部感染而失明的。造成角膜感染的病原微生物主要以细菌、病毒和真菌最为常见。

原理

在所有感染性角膜病中,细菌性角膜炎是最常见的疾病之一,其中尤以金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌感染引起的角膜炎最为严重而且预后不佳。

本模型是用角膜环钻制作的家兔细菌性角膜炎建模方法。

用途

除了环钻法之外,还有角膜划痕法和角膜内注射法成功建立了兔眼细菌性角膜炎动物模型的报道。该方法还可用于金黄色葡萄球菌和链球菌性角膜炎动物模型的建立。

该模型适用于临床眼科抗菌药物的筛选等。

材料与仪器

实验对象:

家兔。

实验器材:

开睑器、注射器、培养皿。

实验试剂:

① 丁卡因滴眼液。
② HE 染色液。

步骤

细菌性角膜炎动物模型的基本过程可分为如下几步:

A. 在丁卡因滴眼液局麻下,用开睑器充分撑开眼睑,可选用 4 号或 6 号角膜环钻以顺时针方向轻轻按压角膜,使角膜造成环形损伤,深度以达到前弹力层为佳。

B.1 ml 注射器吸取 2 × 109/ml 菌液滴于角膜上,每眼 0.1 ml,感染单眼。建模后 24 小时,开始对眼部症状进行观察。

D. 症状评分:

0 级,眼明亮无分泌物;

0.5 级,无分泌物覆盖,眼稍有红肿;

1 级,分泌物覆盖小于 6 mm;

2 级,分泌物覆盖充满 6 mm;

3 级,分泌物覆盖大于 6 mm。

D. 连续观察 7 天,第 8 天摘除眼球,HE 染色,病理学检查。

E. 分别于感染后第 1、3、5 天用无菌棉签取分泌物涂营养琼脂培养皿,36 ℃ 培养 24 小时,判定细菌培养结果。

注意事项

铜绿假单胞菌感染 24-48 小时后,模型眼出现大量微黄绿色分泌物,眼结膜严重充血,角膜浑浊,脓性分泌物使眼睑粘连,轻轻拉开眼睑,分泌物覆盖全眼球。到第 5 天,除少数眼评分为 2.0 级外,余均达 3.0 级。于造模后第 1、3、5 天,采集眼分泌物细菌培养均 100% 阳性。

组织病理学表现为角膜高度水肿、浑浊,前 1/3 基质层可见大量中性粒细胞淋巴细胞成纤维细胞和坏死组织。角膜基质中可见新生血管,部分角膜穿孔,前房积脓。虹膜血管扩张、充血并伴有大量炎症细胞浸润。

来源:丁香实验

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