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酶诱导法构建肺气肿动物模型(肺气肿动物模型建模实验)

相关实验:肺气肿动物模型建模实验

最新修订时间:

简介

猪胰蛋白酶和木瓜蛋白酶是针对弹性纤维的蛋白水解酶,通过气管内滴入直接破坏肺泡间隔的弹性纤维,使肺泡腔持续扩张而形成肺气肿。现广泛用于各种动物肺气肿模型的复制,也是目前最常用的肺气肿动物模型。

但木瓜蛋白酶不是特异性作用于肺泡间隔的弹性纤维,还会同时造成气管壁和血管壁等组织的破坏,现主要用于蛋白酶用量较大的大动物如犬、马及绵羊等肺气肿模型的诱发,而且通常采用雾化吸入的方法使木瓜蛋白酶尽可能进入肺泡,直接作用于肺泡壁。

猪胰蛋白酶是特异性针对弹性纤维的蛋白水解酶,通过一次或多次气管内滴入直接破坏肺泡间隔的弹性纤维,使肺泡腔持续扩张而形成肺气肿,现广泛用于各种动物肺气肿模型的复制。

原理

酶诱导法构建肺气肿动物模型的基本原理是大量研究发现,肺组织中蛋白酶/抗蛋白酶系统失衡是其主要影响因素。肺组织中参与肺泡壁降解的蛋白酶主要是弹性蛋白酶。

许多研究证实,将弹性蛋白酶注入动物肺内可致肺气肿病变,其机制是弹性蛋白酶可分解肺内弹性蛋白、纤维粘连蛋白、胶原等,使肺的弹性回缩力减弱或丧失所致。

材料与仪器

器材:

① 外科动物实验台;

② 气管插管机;

③ 呼吸机;

④ 雾化器药瓶;

⑤ 犬等。

试剂:
① 木瓜蛋白酶;
② 阿托品;
③ 地西泮;
④ 氯胺酮;
⑤ 异戊巴比妥钠;
⑥ Penlon。

步骤

酶诱导法构建肺气肿动物模型的基本过程可分为如下几步:

犬:麻醉前 30 分钟肌内注射阿托品(0.3 mg/kg),地西泮 10 mg。氯胺酮(15 mg/kg)及异戊巴比妥钠(80 mg/kg)肌内注射麻醉,成功后固定于外科动物实验台。静脉给以肌松剂 Penlon(0.02 mg/kg),气管插管机控呼吸。

(1)气管内滴入法

A. 双侧肺气肿模型复制:将 4 g/L 木瓜蛋白酶 30 mL 分次经气管插管内注入,每次 10 mL,每 30 分钟给药 1 次,3 次/天。用药后调整呼吸机参数,潮气量 20~25 mL/kg,呼吸频率 14~16 次/分,呼气末正压通气(PEEP)12~16 cm H2O。持续正压通气 2 小时转为正常通气,动物清醒后拔管饲养。

单侧肺气肿模型复制:行双腔气管插管,需要侧注药,用药量减半。调整呼吸机参数、通气时间同前。6~7 天后重复给药、通气 1 次,共 2 次。

(2)雾化吸入法

A. 双侧肺气肿模型复制:将 6 g/L 木瓜蛋白酶 30 mL 加入雾化器药瓶,三通管连接雾化器排出管与呼吸机吸气管气管插管端,雾化率 2 mL/min。雾化结束后调整呼吸机参数、通气时间同上。

单侧肺气肿模型复制:行双腔气管插管,需要侧三通管与雾化器连接,药物浓度为 3 g/L。调整呼吸机参数、通气时间、重复给药时间及次数同前。

来源:丁香实验

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